酶工程第六章.pptVIP

第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 三、固定化植物细胞 植物是各种天然色素、香精、药物和酶的重要资源。20世纪80年代发展起来的植物细胞培养和发酵技术，为上述这些天然产物的工业化生产开辟了新途径，呈现出美好的前景。然而由于植物细胞体积较大，对剪切力较敏感，加上生长周期长，容易聚集成团等原因，使植物细胞悬浮培养及发酵生产中存在稳定性较差，产率不高等问题。人们在不断探索解决这些问题的途径。其中植物细胞固定化技术所显示的优点对植物游离细胞的不足之处起到弥补作用。 第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 固定化植物细胞具有下列特点： (1) 植物细胞经固定化后，由于有载体的保护作用，可减轻剪切力和其他外界因素对植物细胞的影响，提高植物细胞的存活率和稳定性。 (2) 细胞经固定化后，被束缚在一定的空间范围内进行生命活动，不容易聚集成团。 (3) 固定化植物细胞发酵可以简便地在不同的培养阶段更换不同的培养液，即首先在生长培养基中生长增殖，在达到一定的细胞密度后，改换成发酵培养基，以利于生产各种所需的次级代谢物。 (4) 固定化植物细胞可反复使用或连续使用较长的一段时间，大大缩短生产周期，提高产率。 (5) 固定化植物细胞易于与培养液分离，利于产品的分离纯化，提高产品质量。 第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 植物细胞固定化的方法主要有吸附法和包埋法两种。 吸附法是将植物细胞吸附在泡沫塑料的孔洞或裂缝内，或者将植物细胞吸附在中空纤维的外壁上。例如：将洗净、灭菌后的泡沫塑料粒放进辣椒细胞的培养液中，振荡培养一段时间，辣椒细胞则吸附在泡沫塑料的孔洞内，并在其中进行生长繁殖和新陈代谢。采用中空纤维为载体进行植物细胞固定化是具有美好前景的方法。此法是把植物细胞定置在中空纤维的外壁与外壳容器的内壁之间，细胞吸附在中空纤维的外壁，培养液及氧气在中空纤维的管内流动，各种营养成分及溶解氧透过中空纤维的半透膜管壁传递给管外壁的细胞，植物细胞的代谢产物又通过中空纤维膜分布到管内培养液中，随培养液流出。这种方法近似于植物体内物质的传递与交换形式，有利于细胞生长和新陈代谢的进行。中空纤维作为固定化载体的缺点是有时纤维管会阻塞而影响物质传递，而且中空纤维成本较高，难以大规模生产应用。利用中空纤维固定化植物细胞的研究发展很快。据报道，利用中空纤维固定化的豌豆细胞和胡萝卜细胞进行生产多酚化合物的研究，取得显著效果，可连续使用一个多月。 第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 包埋法是将植物细胞包埋在琼脂、角叉菜胶、海藻酸钙凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、明胶等多孔凝胶之中。包理方法与微生物细胞包埋时基本相同。此法已在植物细胞固定化，以及发酵生产次级代谢物方面广泛采用。 1979年，Brodelius等人首次用海藻酸钙凝胶包埋法制备固定化长春花细胞、毛地黄细胞和海巴戟细胞，开创了植物细胞固定化的研究。此后，此技术迅速发展，已有不少成功的报道。 第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 四、动物细胞固定化 动物细胞可生产激素、酶和免疫物质等动物功能蛋白质。但由于动物细胞体积大，又没有细胞壁的保护作用，在培养过程中极易受剪切力等外界因素的影响。加上动物细胞生长缓慢，培养基组分较复杂昂贵，产率不高等因素，使动物细胞在生产上的应用受到限制。为此需在提高动物细胞稳定性、缩短生长周期、提高生产速率方面下功夫。其方法之一就是进行固定化。 动物细胞中，除了一部分属于悬浮细胞，可以自由悬浮在培养液中以外，绝大部分属于附着细胞，它们必须附着在固体表面才能进行正常的生长繁殖。这就使固定化技术在动物细胞培养方面具有更重要的意义。 第三节 微生物、植物和动物细胞固定化 固定化动物细胞有下列特点： (1) 提高细胞存活率：动物细胞经固定化后，由于有载体的保护作用，可以减轻或免受剪切力的影响，同时动物细胞可附着在栽体表面生长，从而可显著提高动物细胞的存活率。 (2) 提高产率：动物细胞固定化后，可先在生长培养基中生长繁殖，使细胞在载体上形成最佳分布并达到一定的细胞密度。然后可简便地改换成发酵培养基，控制发酵条件，使细胞从生长期转变到生产期，以利于提高产率。 (3) 固定化动物细胞可反复使用或连续使用较长的时间，利于连续化自动化生产。 (4) 固定化细胞易于与产物分开，利于产物分离纯化，提高产品质量。 动物细胞固定化的方法有吸附法和包埋法两种。现分述如下： 第三节 微生物、植物和动物细