入境环保微生物菌剂检测方法 第2部分：短小芽孢杆菌 编制说明.docVIP

1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 入境环保用微生物菌剂检测方法 第部分：芽孢杆菌agentia for environment protection Part 2: Bacillus pumilus 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 等同 修改 非等效 标准号 英文名称 中文名称 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 国认科2011 58号 计划编号 1.4 制（修）订情况 制订√ 修订 替代的标准编号 1.5 起止时间 2012年1月～2013年5月 1.6 起草单位 辽宁出入境检验检疫局 1.7 起草人 1.8 专业类别 1、食品（化妆品）检验；√2、卫生检疫；3、动物检疫；4、植物检疫； 5、纺织产品检验；6、轻工产品检验；7、机电产品检验；8、化工、矿产品和金属材料检验；9、管理；10、鉴定；11包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 无 2 背景情况 2.1 目的、意义 环保用微生物菌剂是指从自然界分离纯化或者经人工选育等现代生物技术手段获得的，主要用于水、大气、土壤、固体废物污染检测、治理和修复的一种或者多种微生物菌种。芽孢杆菌资料收集分析阶段：项目组根据分工通过搜索互连网、查阅文献资料等手段收集当前国内外有关芽孢杆菌检验的各种法规、标准及文献。芽孢杆菌芽孢杆菌芽孢杆菌芽孢杆菌1]蒙显英，黎起秦，冯家勋，等.芽孢杆菌产生的抗菌物质的研究进展[J].中国植保导刊， 2004，12:13-15. [2]刘国红,林乃铨,林营志，等，芽孢杆菌分类与应用研究进展[J].福建农业学报，2008，23(1):92-99, [3]唐娟，张毅，李雷雷，等.地衣芽孢杆菌应用研究进展[J].湖北农业科学，2008，47(3)：351-354. [4]吴伟，瞿建宏，胡庚东，等.巨大芽孢杆菌对池塘微碱性水体中磷的形态和含量的影响[J].农业环境科学学报，2008，27(4)1508-1513. [5]李献梅,王小芬，等.促旋酶(gyrase)B亚单位基因gyrB在鉴别细菌近缘种中的应用[J].微生物学报，2008，48(5)：701-706. [6]侯颖，孙军德，徐建强，等.巨大芽孢杆菌对养殖水体氨氮降解特性研究[J].沈阳农业大学学报，2006-08，37(4)：607-610. [7]程池，刘光全，李金霞，等.55株芽孢杆菌16S rRNA基因序列测定与系统发育学分析[J].食品与发酵工业，2006,32（10）：20-24. [8]程琳琳，王芳等，微生物菌剂中五种芽胞杆菌实时PCR鉴定[J].中国卫生检疫杂志，2010,246-249. [9]曹凤明，沈德龙，李俊，等.应用多重PCR鉴定微生物肥料常用芽孢杆菌[J].微生物学报，2008，48(5)：651-656. [10]刘勇，毛爱军等，枯草芽孢杆菌群β-甘露聚糖酶基因克隆及同源性分析，基因组学与应用生物学，2009 年，第28 卷，第5 期，第845-850 页 标准在研制过程中，在方法的灵敏度、模拟样品检测等方面做了大量实验，并对所建立的标准方法进行了应用研究。本标准经过验证实验，证明切实可行。本标准检验方法是在以上研究、验证和鉴定的基础上进行起草的。 3.4 征求意见情况（适用于送审稿） 3.5 审定情况 （适用于报批稿） 3.6 预期的管理目标（适用于规程类标准）或技术指标（适用于方法类标准） 本标准规定了进境中芽孢杆菌。 本标准适用于进境中芽孢杆菌检和鉴定。在无菌条件下，取g（mL）样品mL灭菌生理盐水，移取1环菌连续划线接种5个营养琼脂平板，36±1℃培养18～24h。 检测以外剩余样品作为保留样品，将保留样品密封，一般将保留样品密封保存于0℃～4℃，妥善保留3个月。 依据《伯杰细菌鉴定手册》（第版，194）中第十五部分芽孢杆菌，对该菌进行形态学取已纯化的菌株进行革兰氏染色和芽孢染色。菌体细杆状，一般为0.6~0.7μm×2.0~3.0μm，革兰氏阳性1μm，内生孢子，芽孢不膨大，不形成伴胞晶体。镜检观察细形状、芽孢形状及形成伴孢晶体等。 4.2.2生理生化试验依据《伯杰细菌鉴定手册》（第版，）中第十五部分芽孢杆菌，对该菌进行生理生化试验，将纯化菌株接种到营养琼脂斜面和营养肉汤中，取增菌后的菌体进行生理生化试验，包括接触酶、氧化酶、厌氧生长，以及利用碳水化合物产酸实验如葡萄糖、木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、利用葡萄糖产气、柠檬酸盐、硝酸盐，50℃生长、pH5.7生长、7%NaCL生长、淀粉水解、明胶液化实验等。典型芽孢杆菌生化见表1。 表1 典型芽孢杆菌生化接触酶 + + 氧化酶 + 硝酸盐还原 - 厌氧生长 - 50℃生长 +葡萄糖 +pH5.7