出口原奶中β-内酰胺类抗生素快速检测方法 编制说明.docVIP

《出口原奶中β-内酰胺类抗生素快速检测方法》 编制说明 一、标准制定的任务来源及意义 1. 任务来源 本标准来源于国家认证认可监督管理委员会下达的制标计划任务《出口原奶中β-内酰胺类抗生素快速检测方法》（计划编号为2011B300k）。本标准由北京出入境检验检疫局起草。 2. 目的和意义 β-内酰胺类抗生素（β-lactams）系指化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗生素，包括临床最常用的青霉素与头孢菌素，以及新发展的头霉素类、硫霉素类、单环β-内酰胺类等其他非典型β-内酰胺类抗生素。是目前医药和兽药行业治疗感染性疾病应用最多的一类抗生素，常用于治疗和预防葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌、大肠杆菌、嗜血杆菌、沙门氏菌引起的动物尿道、胃肠道和呼吸道感染，具有杀菌活性强、毒性低、适应症广及临床疗效好的优点。目前，兽医临床上主要使用的β-内酰胺类抗生素有青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、氯唑西林、苯唑西林、头孢匹林、头孢喹肟、头孢唑啉、头孢噻呋等，广泛用于奶牛乳房炎的预防和治疗。可是，由于β-内酰胺类抗生素使用方法不当或非法超量添加等原因，均可造成其在牛奶中的残留，导致皮肤红斑等过敏反应、胃肠道紊乱、腹泻、恶心和呕吐，以及细菌耐药性增强，给牛奶的食用安全性带来严重的问题，给百姓身体健康带来潜在的危害。 随着人们对β-内酰胺类抗生素代谢机理、毒理及残留研究的不断深入，欧盟、中国、美国、日本、国际食品法典委员会都已经对动物源性食品中β-内酰胺类抗生素残留规定了最大残留限量值，其中欧盟规定青霉素G、氨苄西林、阿莫西林的MRL为4ppb，苯唑西林、邻氯西林、双氯西林、呐呋西林的MRL为30ppb，头孢氨苄的MRL为100ppb，头孢唑啉、头孢哌酮的MRL为50ppb。严格控制β-内酰胺类抗生素在畜牧业中的应用，我国已将β-内酰胺类抗生素列入对我国动物源性食品实施的残留监控计划中。乳及乳制品中β-内酰胺类抗生素的的检测目前较多采用放射受体分析法、微生物检测法，也有液相色谱-质谱/质谱法，文献中也有关于酶联免疫层析技术检测，本方法奶中11种β-内酰胺抗生素（青霉素G、阿莫西林、氨苄西林、氯唑西林、萘呋西林、苯唑西林、头孢哌酮、头孢匹林、头孢喹肟、头孢唑啉、头孢噻呋）的同时检出，未见报道。 三、方法概述 本方法利用β-内酰胺β-内酰胺取经确证的阴性牛奶样品，分别添加11种β-内酰胺类抗生素。浓度范围具体为：青霉素G 1～5 μg/L，阿莫西林 1～5 μg/L，氨苄西林1～5 μg/L，氯唑西林 1～10 μg/L，萘呋西林 5～20 μg/L，苯唑西林 5～30 μg/L，头孢哌酮 1～10 μg/L，头孢匹林 5～20，头孢喹肟 5～30 μg/L，头孢唑啉 20～200 μg/L，头孢噻呋 50～500 μg/L，每种药物选择5个浓度进行添加，每个浓度各10份。用进行检测。表 检测限确定 添加药物 添加浓度 （μg/L） 阳性数量 添加药物 添加浓度（μg/L） 阳性数量 青霉素G 1 0 头孢哌酮 0 2 10 3 0 3 10 6 10 4 10 8 10 5 10 10 10 阿莫西林 1 0 头孢匹林 0 2 0 8 10 3 10 11 10 4 10 15 10 5 10 20 10 氨苄西林 1 0 头孢喹肟 0 2 0 10 10 3 10 15 10 4 10 20 10 5 10 30 10 氯唑西林 0 头孢唑啉 0 3 0 50 10 6 10 100 10 8 10 150 10 10 10 200 10 萘呋西林 0 头孢噻呋 0 8 10 100 10 11 10 200 10 15 10 300 10 20 10 500 10 苯唑西林 0 10 10 15 10 20 10 30 10 结果显示本方法的检测限为青霉素G：2 μg/L，阿莫西林：3 μg/L，氨苄西林：3 μg/L，氯唑西林：6 μg/L，萘呋西林：8 μg/L，苯唑西林：10 μg/L，头孢哌酮：6 μg/L，头孢匹林：8 μg/L，头孢喹肟：10 μg/L，头孢唑啉：50 μg/L，孢噻呋：100 μg/L。选择与的其他临床常用，且非β-内酰胺类药物，对空白样品进行添加测定，通过阴阳性来判断本方法的特异性。在空白奶样中添加2 μg/L、20 μg/L、200 μg/L，各20份：青霉素G（PG）、四环素（TC）、阿维菌素（AVM）、链霉素（STM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、庆大霉素（GEN）。进行检测表 特异性检测的结果 2 μg/L 20份阳性 20份阴性 20份阴性 20份阴性