国境口岸圣路易斯脑炎病毒实时荧光RT-PCR方法 编制说明.docVIP

出入境检验检疫行业标准草案编制说明 1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 国境口岸圣路易斯脑炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法 英文 Detection Method for St.Louis Encephalitis Virus by real-time fluorescence RT-PCR at frontier ports 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 □等同 □修改 □非等效 标准号 英文名称 中文名称 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 质检科研公益性行业专项（200810162）项目 计划编号 2011B307k 1.4 制（修）订情况 □制定 □修订 替代的标准编号 1.5 起止时间 2011年 6 月--- 2012年10 月 1.6 项目承担单位 中国检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局 1.7 起草团队 胡孔新、史蕾、杨鹏飞、燕清丽、张丽萍、徐焕洲、孙肖红、刘丽娟、杨宇、王静 1.8 专业类别 □食品（化妆品）检验；□卫生检疫；□动物检疫；□植物检疫； □纺织产品检验；□轻工产品检验；□机电产品检验；□化工、矿产品和金属材料检验；□管理；□鉴定；□包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 将“国境口岸圣路易斯脑炎病毒实时荧光RT-PCR方法”改为“国境口岸圣路易斯脑炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法”。 2 背景情况 2.1 目的、意义 圣路易斯脑炎（St Louis Encephalitis，SLE）是由圣路易斯脑炎病毒引起，经蚊媒传播的人畜共患中枢神经系统感染性疾病。最初于1932年夏流行于美国伊利诺斯（Illrnois）州的帕里斯（Paris），翌夏又爆发流行于密苏里（Missouri）州的圣路易（St.Louis）市一带，病例达１０００余人，故命名为圣路易脑炎。圣路易斯脑炎病毒，属黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)单股正链RNA病毒，与日本脑炎病毒、西尼罗病毒、 默累谷脑炎病毒（Murray Valley Encephalitis virus）、昆津病毒（Kunjun virus）等同属一个血清型，是一种虫媒病毒，主要经库蚊（在美国确定的传播媒介以蚊子Culex tarsalis、Culex pipiens、Culex quinquefasciatus 和Culex nigripalpus为主）传播，鸟类为主要宿主，以鸟-蚊-鸟的循环作为基本传播周期。人类是目前已知的自然感染该种病毒后致病的唯一物种，该病毒感染人类后可引起发热、头痛等流感样症状，也可表现为中枢神经系统感染症状，严重者可死亡。本病流行限于北美洲，主要在密西西比河和俄亥俄河流域。圣路易脑炎病毒在美国已流行数十年。SLE爆发于夏季，主要出现在美国佛罗里达和中西部、西南部的州以及密西西比河流域。各年龄组均可发病，但儿童发病者相对较少，老年人易发生严重感染。SLE流行基本环节为蚊一鸟一蚊传播环。本病传染源主要是野鸟和家禽，呈周期性爆发。城市中鸽子和麻雀在病毒的自然界增殖中起重要作用。作为一种蚊传播的病原体，主要传播媒介是跗斑库蚊（culextarsalis）、尖音库蚊（culexpipiens）和黑须库蚊（nigripapus）。境外一些来自疫区的现症患者或媒介通过国境口岸的带入，均可引起登革圣路易脑炎病毒在我国的扩散。因此，随着我国与世界各国交通往来的日益频繁，在国境口岸建立一种圣路易脑炎病毒的快速检验鉴定方法，是检验检疫机关迫切而重要的 工作内容之一。制定本标准主要是想通过实时、快速的检测鉴定手段，判断国境口岸可疑病 人或可疑蚊子是否携带圣路易脑炎病毒，从而防止圣路易脑炎病毒传入，具有重要的社会效益和经济效益。 2.2 与国内外相关标准、文献的关系 针对圣路易斯脑炎病毒实时荧光RT-PCR方法目前还没有相关的国家标准或行业标准，只在一些文献中找到对该病毒的相关检测报道。 3 编制过程 3.1 准备阶段（可选项） 3.2 分工情况 深圳出入境检验检疫局负责引物探针设计及方法的建立。 中国检验检疫科学研究院负责验证。 3.3 标准草案编写情况 已完成 3.4 征求意见情况（适用于送审稿） 挂网征求意见。 3.5 审定情况 （适用于报批稿） 专家审定通过 3.6 预期的管理目标（适用于规程类标准）或技术指标（适用于方法类标准） 建立方法并进行实际应用。 4 主要技术内容的确定 4.1引物、探针的设计与合成 从NCBI下载圣路易斯脑炎病毒的核酸全序列共11株，用DNAMAN软件进行序列分析，找到共同的NS5保守区进行引物及探针设计(见图1)。NS5蛋白具有RNA依