化学品 鱼类胚胎毒性试验.docVIP

目 次 前 言 II 1 范围 3 2 术语和定义 3 缩略语 3 试验原理 3 试验初步考虑 4 试验方法的局限性 4 方法描述 4 .1 试验容器 4 .2 试验用水 4 .3 鱼类孵育 5 .4 产卵 5 .5 受精卵分化 5 .6 受试溶液 5 试验程序 5 .1 暴露 5 .2 试验浓度 6 .3 对照 6 .4 观察 6 数据和报告 6 .1 结果处理 6 .2 试验报告 7 参考文献 8 表1 斑马鱼胚胎48 h急性毒性观察表 6 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准技术内容根据与经济合作与发展组织（OECD）提出《鱼类胚胎毒性试验》（FET试验）一致。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：崔媛、程艳、陈会明、谢文平、。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 化学品 鱼类胚胎毒性试验 1 范围 本标准规定了化学品鱼类胚胎毒性试验方法。 本标准适用于化学品对鱼类胚胎早期发育毒性的测试。 2 术语定义 下列术语定义适用于本标准。 2.1 囊胚 blastula 囊胚是动物极旁边形成的一类细胞其中包含一定的卵黄细胞。 2. 自由胚胎阶段 eleutheroembryo stage 在孵化和开始摄取外界养料（卵黄囊鱼苗阶段）之间的阶段。 2. 半静态试验 semi-static test 没有流动溶液的试验，但在长时间（如24 h）后会分批更新受试溶液。 2. 静态试验 static test 是水生生物在无流量受试溶液中进行的试验，在整个测试期间不更换受试溶液。 缩略语 下列缩略语适用于本标准。.1 半数致畸浓度 EC50 统计得出在已定义条件的环境介质中，对一个特定的群体中50%的受试有机体产生一定的影响的浓度。 .2 最低观察效应浓度 lowest observed effect concentration LOEC 是受试物质与对照组相比时被观察到有显著性效应（p ＜0.05）的最低的受试浓度。然而，所有高于LOEC的受试浓度所产生的有害效应都应等于或高于在LOEC时所观察的效应。 .3 无观察效应浓度 NOEC 低于LOEC的受试物浓度。 试验原理 斑马鱼胚胎分别暴露在放有一定浓度范围的受试物溶液的24孔微量滴定板中。该试验是胚胎受精后立即开始，并持续进行48 h。致死效应由4项顶端点来描述，通过与对照组比较，来确定LC50，NOEC，LOEC值。试验方法是最少使用5个受试浓度以及适当的控制，每个暴露浓度中10个胚胎。每种物质应同时进行测试，2个或3个平行样。 试验初步考虑 .1 在正常条件下，测试48 h后，可以终止。然而，如果有延迟毒性存在的迹象或证据[1][2]，试验持续时间可以延长到6天)，例如，2天孵化后。在开始为胚胎提供外界养料前应停止暴露。 .2 受试物的溶解度和蒸气压应已知，并提供一个可靠的分析方法，。以下信息一般应在之前进行生物测定：受试物的结构式和纯度、水和光中的稳定性、，p和K。关于化学稳定性，一个现的生物降解性试验1][2]的结果可能是有用的。溶解度和蒸气压可以被用于计算Henry常数，这将表明，受试物的损失，可能会发生。如果如上所述，有证据表明溶液中的受试物的浓度不能保持恒定，则应进行半静态试验。进行14C标记或非放射分析，以确保暴露化学品渗透绒毛膜和达到目标位点。 .3 事先选用一种参考物质进行试验估算其EC50值可确认试验条件的可行性。此前推荐环测试的毒物就是出于此原因1][2]。例如，3,4 -二氯苯胺常用来作为参考物质，最好每三个月试验一次来保证试验的性能。 试验方法的局限性 对于具有高亲油性、波动性、缺乏稳定的物质本试验可能不能进行充分评估，需要使用其他试验指南3]。受试物的分子大小和电荷对试验也有影响,因为分子必须通过胚胎的绒毛膜和生物膜来到达目标位点。 方法描述 以下描述的试验程序主要是指斑马鱼的试验方法，然而,适当的修改后可用于其他方法,例如,日本青鳉和黑头呆鱼。相关的维护和试验条件的具体概述对斑马鱼、黑头呆鱼和日本青鳉三种鱼类都适用。 .1 试验容器 使用容积为2mL ~ 5mL的玻璃或聚苯乙烯板（24孔板）来进行暴露。如果担心聚苯乙烯吸附，则使用惰性材料（玻璃）。圆底板最好选用体视显微镜，平底板选用倒置显微镜，在试验区域内随机选取试验容器。 .2 试验用水 .2.1 鱼类的日常饲养水应为符合ISO标准3]的稀释水或经木炭过滤的饮用水。在试验开始之前和试验过程中水质保持稳定。饲养水的pH值应保持在6.8 ~ 8.4之间，在给定试验中对照