NY_T 914-2004 饲料中氢化可的松的测定 高效液相色谱法.docVIP

饲料中氢化可的松的测定 高效液相色谱法 Determination of Hydrocortisone in Feeds —High—performance Liquid Dhromatography 2005-01-04 发布 2005-02-01 实施  前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(成都)、成都华西希望集团。 本标准起草人：李云、林顺全、余林、冯娅。 饲料中氢化可的松的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱法(HPLC)检测饲料中氢化可的松含量的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氢化可的松地测定。本方法最低检测限 为0.05 mg/kg。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 方法原理 用甲醇提取试样中的氢化可的松,以乙腈、水作为流动相,用高效液相色谱——紫外检测法分离测 定。 试剂和溶液 除特殊注明外,本法所用试剂均为分析纯,水符合GB/T 6682一级水的规定。 乙腈 色谱纯。 甲醇 色谱纯。 氢化可的松标准液 氢化可的松标准贮备液 准确称取氢化可的松标准品(纯度≥98％)0.1000 g,置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解,定容，其 浓度为1 000μg／mL的储备液，置于4℃冰箱中保存。 氢化可的松标准工作液 分别准确吸取一定量的标准贮备液(4.3.1)，稀释10倍,用甲醇稀释、定容，配制成浓度为2.5 μg/mL、5.0μg/mL、7.5μg/mL、10.0μg/mL、12.5μg/mL、17.5μg/mL的标准工作液。 仪器和设备 实验室常用仪器、设备。 高效液相色谱仪 配紫外检测器。 电子天平 感量0.000 1 g。 离心机 3 000 r/min。 振荡器 玻璃具塞三角瓶 250mL。 微量进样器 微孔滤膜 0.45 μm。 试样制备 按GB/T 14699.1抽样，取有代表性的样品，四分法缩减取约200 g，经粉碎，全部过40目孔筛，混 匀装入磨口瓶中备用。 测定步骤 提取 按不同的饲料产品,准确称取配合饲料、浓缩饲料2 g～10 g,预混料0.5 g～4 g(准确至0.000 2 g) 样品,置于250 mL玻璃具塞三角瓶中,加入40 mI。甲醇,往复震荡30 min,静止10 min,过滤,再向饲料 中分别加入30 mL甲醇,重复提取2次。合并3次提取液,用甲醇定容至100 mL。取10 mL置离心管 中,3 000 r/min离心5min,取上清液用0.45μm微孔有机滤膜过滤作为试样制备液,供高效液相色谱分 析。 测定 HPI足色谱条件 色谱柱：C18柱，长240mm、内径4.6mm(i.d.)，粒径5.0μm或相当者。 柱温：室温。 流动相：乙腈十水=25+75(V+V)。 流速：1.0mL／min。 波长：254nm。 进样体积：20μL。 HPLC定量测定 按仪器说明书操作,取适量试样制备液和相应浓度的标准工作液,作单点或多点校准,以色谱峰面 积积分值定量。 确证 对检出氢化可的松的样品，应用重叠色谱分析来确证。 重叠色谱法 以试样提取液中加人适量的氢化可的松标准工作液(4.3.2),加入的量应与提取液中的氢化可的松 的量相当。 依次注入样品的提取液、氢化可的松标准工作液(4.3.2)和添加了氢化可的松标准工作液(4.3.2) 的样品提取液。如果添加氢化可的松标准工作液(4.3.2)的样品提取液样品所产生峰的半峰宽变化不 大于10％，且峰高或峰面积发生了成比例的变化，则可确证原氢化可的松峰就是氢化可的松的。 9 结果计算与表述 9.1 计算公式 m1 m×n 试样中氢化可的松的含量按式(1)计算： X= ………………………………………(1) 式中： X ——试样中氢化可的松的含量，