进出口动物源食品中多种米尔贝霉素残留量的测定编制说明.docVIP

《进出口动物源食品中多种米尔贝霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》编制说明 一、任务来源 国家认证认可监督管理委员会下达我局研究制定《进出口动物源食品中多种米尔贝霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》标准任务，计划编号为2010B135。按照检验检疫行业标准SN/T0001-1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》（以下简称《规定》）和国家质检总局颁发的《残留分析质量控制指南》的要求，在参考前人对米尔贝霉素类药物检测方法的研究基础上，我局组织有关人员对课题进行了实验，经山东出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、辽宁出入境检验检疫局、深圳市计量质量检测研究院、深圳市疾病预防控制中心等单位进行了验证试验，本方法的各项技术指标均达到《规定》的要求。 二、研究背景 米尔贝霉素（milbemycins）属大环内酯类抗生素，其结构与大环内酯阿维菌素类似，是从链霉菌的发酵物中分离得到的十六元大环内酯混合物，主要用于农植物与动物的除虫，由于具有广谱高效的驱虫活性和较高的安全性，被誉为当今活性最高的杀虫剂和目前最有前途的抗虫抗生素。它的作用原理而是通过激动2-氨基丁酸( GABA) 来阻断寄生虫的中枢神经系统信号向运动神经元传送,使虫体麻痹致死。米尔贝霉素目前在国外广泛用于犬科及其他动物，对犬和猫的犬恶丝虫的微丝蚴、肠道线虫以及螨等体外寄生节肢动物都有很好的驱除和杀灭作用，同时对牛、羊以及狒狒等动物的体内外寄生虫也有很好的防治效果。该药具有对害虫作用强烈、用药量少、对人畜安全、不污染环境、只杀害虫、不伤害天敌，也不易产生抗性的特点，可作为防止该类药物产生抗性的复配及轮换用药，是目前最有前途的广谱、高效、新型无交叉抗性的生物杀虫剂 。 奈马克丁、米尔贝霉素A3、米尔贝霉素A4、米尔贝霉素D、莫西丁克均属于米尔贝霉素族化合物，是研究最多的几种有效成分。尽管米尔贝霉素具有较高的安全性，但是在我国尚未批准使用，而国外已经广泛应用此类药物。因此，十分有必要建立动物源食品中多种米尔贝霉素的检测方法，做好相关技术储备，以保障我国进口食品安全，同时，该方法的建立对于构建我国的技术贸易壁垒体系具有积极的意义。目前国外对米尔贝霉素类药物，除了莫西丁克之外，均未制定残留限量标准，欧盟、美国、日本对莫西丁克在牛/羊肉中的MRL为20 μg/kg，牛/羊肝脏中为100 μg/kg，牛/羊肾脏中为50μg/kg，牛乳中为40 μg/kg。 目前我国尚无米尔贝霉素检测的国家标准，有一项行业标准针对对动物源性食品中莫西丁克残留量检测，国内对米尔贝霉素的研究较少，尚无检测方面的文献报道。国外文献报道的检测方法主要是液相色谱荧光检测法和液相色谱质谱法, 报道了对牛奶、肌肉、肝脏样品中莫西丁克的测定，对牛奶中奈马克丁的测定和牛肉及牛肝中密灭汀的测定等。本方法采用叔丁基甲醚和乙腈提取试样中的莫西丁克、奈马克丁、米尔贝霉素A3、米尔贝霉素A4、米尔贝霉素D，通过固相萃取净化后，用LC-MS/MS测定，外标法定量。5种米尔贝霉素类药物的基本信息见表1。 表1 5种米尔贝霉素类药物的基本信息 化合物 英文名 Cas No. 分子式 分子量 分子结构 莫西丁克 Moxidectin 113507-06-5 C37H53NO8 639.8 米尔贝霉素A3 Milbemycin A3 51596-10-2 C31H44O7 528.7 米尔贝霉素A4 Milbemycin A4 51596-11-3 C32H46O7 542.7 米尔贝霉素D Milbemycin D 77855-81-3 C33H48O7 556.7 奈马克丁 Nemadectin 102130-84-7 C36H52O8 612.8 三、本标准分析条件的选择和优化 本标准的检测目标化合物为莫西丁克、米尔贝霉素A3、米尔贝霉素A4、米尔贝霉素D、奈马克丁等5种米尔贝霉素类药物。 1 液相条件优化 实验中对比了甲醇+水、乙腈+水、甲醇+乙酸铵水溶液（含0.05%甲酸）、甲醇+水（含0.1%甲酸）做流动相的色谱效果，实验表明，采用甲醇做流动相，对5种化合物的分离效果较乙腈好，由于化合物均在ESI+模式下检测，在流动相中加入少量甲酸可以有效地提高检测的灵敏度，选择甲醇+水（含0.1%甲酸）做为流动相并采用梯度洗脱时，5种化合物的分离度和灵敏度较好。 实验还对比了不同色谱柱的分离效果，比较了Poroshell 120 EC-C18 色谱柱，150 mm×2.1 mm (i.d.），2.7 μm， ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱， 3.5μm ， 150mm×2.1mm (i.d.) ， Inertsil ODS-3 色谱柱, 3μm ，100