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ICS SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 进出口食品中香豆素及其衍生物含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Coumarins Residues in Food for Import and Export LC/MS/MS method XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准依据GB/T1.1—2009要求的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：湖北出入境检验检疫局 本标准主要起草人： 进出口食品中香豆素及其衍生物含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了进出口食品中香豆素及其衍生物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于进出口饼干、饮料及冰淇淋中香豆素、6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定及确证。 方法提要 样品中的香豆素、6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙氧基-4-甲基香豆素用无水乙醇提取，离心过滤后，用液相色谱串联质谱法进行测定，外标法定量。 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯, 水为超纯水。 甲醇：色谱纯。 无水乙醇。 乙腈：色谱纯。 无水硫酸钠。 0.002 mol/L醋酸铵溶液：称取适量醋酸铵，以水溶解定容至1 000 mL。 香豆素、6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲氧基香豆素、醋硝香豆素和7-乙氧基-4-甲基香豆素标准物质：纯度大于等于95 %，其它信息见附录A。 标准储备液：准确称取适量标准品（精确至0.000 1 g），用甲醇溶解配制浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，保存于-18℃冰箱内。 中间标准溶液: 移取1.0 mL标准储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配成100.0 μg/mL，保存于4℃冰箱内。 基质标准工作液：临用前根据需要，移取适量的中间标准溶液，用空白基质溶液稀释至适当浓度。 微孔滤膜：0.22 μm，有机相型。 仪器和设备 高效液相色谱—质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 振荡器。 离心机：8 000 r/min。 快速溶剂浓缩仪。 分析天平，感量为0.1 mg，0.01 g。 涡旋混合器。 试样制备和保存 取有代表性样品50 g，混合混匀，分成2份，分别装入洁净容器内，密封并标识，将试样存放于4℃冰箱内。 在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 测定步骤 提取 准确称取食品样品1.0 g于50 mL离心管内，加入5 g无水硫酸钠和10 mL无水乙醇，振荡10 min，在8 000转下离心5 min，取上层于另一50 mL离心管中，残渣再分别加入10 mL无水乙醇重复提取两次，合并上清液，45℃快速溶剂浓缩仪减压浓缩至干，精确加入5.0 mL甲醇溶解残渣，过0.22 μm滤膜，滤液供LC-MS/MS测定。 测定 液相色谱条件 色谱柱：C18柱，150 mm(2.1 mm（内径），粒径3.5 (m，或相当者； 流动相：0.002 mol/L醋酸铵溶液-乙腈-甲醇（20+10+70，v/v/v）； 流速：0.2 mL／min； 进样量：5 μL； 柱温：35℃。 质谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测（MRM）； 其它参考质谱条件参见附录B。 定量测定 根据样液中被测物含量情况，选定浓度相近的基质标准溶液一起进行色谱分析。基质标准溶液和样液中被测物的响应值均应在仪器检测线性响应范围内。对基质标准溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，6种被测物的保留时间参见附录B。色谱图参见附录C图C.1—C.6。 定性测定 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至50% ＞10%至20% ≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 结果计算和表述 用色谱数据处理软件或按式（1）计算试样中被测物含量，计算结果需将空白值扣除： ……………………………………………（1） 式中：X——试样中被测物含量，单位为