鸡β2微球蛋白的基因克隆与原核表达.pdfVIP

中国动物传染病学报 2014,22(1): 63-68 Chinese Journal of Animal Infectious Diseases ·研究论文· 鸡β2 - 微球蛋白的基因克隆与原核表达 徐文财 1 ，刘 秋 1 ，李 旦 1 ，胡序明 1,2 ，吴庚华2 ， 钱 琨 1,2,3 ，邵红霞 1,2,3 ，金文杰 1,2,3 ，秦爱建 1,2,3 （1. 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室，扬州 225009 ； 2. 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室， 扬州 225009 ；3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009 ） 摘 要：本研究通过RT-PCR 从正常鸡外周血淋巴细胞总RNA 中扩增ch β2m 基因全长片段，然后将其克隆至原核表达载体 pET-32a （+ ），转化大肠杆菌BL21 （DE3 ），用IPTG 对其进行诱导表达，利用HiTrap 亲和柱对表达产物进行纯化。结果显示， 采用RT-PCR 扩增出ch β2m 基因全长约360 bp ，编码120 个氨基酸，与基因库公布的相一致，同源性为100%；经0.8 mM IPTG 诱导表达后，SDS分析发现ch β2m 融合蛋白主要以可溶性形式存在于细菌裂解上清；利用His 标签纯化该蛋白， SDS分析仅见约34 kDa 大小的ch β2m 融合蛋白条带；Western-blot 分析表明，纯化后的ch β2m 融合蛋白与特异单克隆 抗体反应呈现特异性的条带。以上结果证实，本研究成功表达并获得了纯化的可溶性ch β2m 融合蛋白，为进一步对ch β2m 结 构及其功能研究奠定基础。 关键词：β2- 微球蛋白；基因克隆；原核表达 中图分类号：S858.312.42 文献标志码：A 文章编号：1674-6422 （2014 ）01-0063-06 CLONING AND EXPRESSION OF CHICKEN β2-MICROGLOBULIN IN ESCHERICHIA COLI 1 1 1 1,2 2 1,2,3 1,2,3 XU Wen-cai , LIU Qiu , LI Dan , HU Xu-ming , WU Geng-hua , QIAN Kun , SHAO Hong-xia , JIN Wen-jie1,2,3, QIN Ai-jian1,2,3 (1. Ministry of Education Key Lab for Avian Preventive Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China; 2. Key Laboratory of Jiangsu Preventive Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China; 3. Jiangsu Co-innovation Center for Preven tion and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou 225009, China) Abstract: chβ2m gene was amplifi ed from normal chicken peripheral blood lymphocytes by RT-PCR. It was cloned into pET-32a(+) vector and induced by IPTG, then purifi ed with HiTrap affi nity column. The results showed that t