胞和组织中甘油三酯的简易快速分析法.pdfVIP

维普资讯 维普资讯 维普资讯 Ee n 平板，2小时者涂于6孔板，8小时者涂于 24孔板 ，24小 细胞和培养物)含有脂肪、蛋白质、碳水化合物和核酸的 时者涂于48孔板。用GPBS—EDTA将细胞洗脱出来，离心， 复杂混合物中是否能测定TG。为弄清这一问题，我们将大 把无油酸盐的样品重悬浮于250ulGPBS—EDTA，其它样品 量的组织培养基或HeLa细胞加至分析系统，在这两种情况 则经PBS洗后转至400ulGPBS—EDTA中。将200ulTO—HeLa 下，540am波段的光吸收增加值虽然不大，但与GPBS— 细胞悬浮液加至IHW 中，在干冰储存，而后同时对样品进 EDTA (P0．0001)相比却很明显。不管是培养基中的血 行处理。用方差分析确定各处理之间的差异是否显著。 清，还是HeLa细胞都含有TG。因此，这些样品中的TG可 能会引起光吸收的少许增加。培养基或HeLa细胞都不会改 铸鬟 变直线的斜度，表明这两种复杂的混合物都不会抑~IjTG的 我们用临床酶联比色试剂创建了一个测量细胞和组织 检测。 中经溶剂抽提的TG的最适程序，在96孔格式中，用蒸发 溶剂和读取光吸收的办法实现了了最大通量分析。 每种乙酰甘油都会以各自的速率引起540nm波段光 吸收的增加 乙酰甘油可导致540nm波段处精确的线性增长 为了确定合适的保温时间，我们对乙酰链的饱和度和 为了验证这一新法，我们选取一系列指定增量的乙酰 数 目对540nm波段光吸收增加速率的影响差异进行了测评， 甘油，测定了它们所导致的540am光吸收的增长。此系统 发现不饱和的三油精光吸收的增加速率高于饱和的三棕榈 能检测甘油分子导致的光吸收的增长，我们所以预期此系 酸甘油酯，而且棕榈酸盐附着在甘油的数量越少，光吸收 统也能检测分配在有机相中的其它分子 以及能被LPL水解 增加速率就越快。尽管对光吸收增加速率的影响有明显不 成游离甘油的分子。乙酰甘油的分子量因乙酰链的长度和 同，但被测试的4种乙酰甘油所驱动的反应在90分钟时都 数量相差很大。由于这种分析处理的是甘油的克分子数 ， 接近完成。 所 以当以质量为标准时乙酰甘油的光吸收改变就有所不同 (P0．0001)，但是当以克分子为标准时，则三油精和二油 这种分析方法对多种乙酰甘油油类都能有效地进行定 精在540nm波段的光吸收增加值就相同，分别为21．22和 量 21．08吸收单位，微克分子；单油精的光吸收略微低一些，为 为了评估这种方法所检测的油类范围，我们试验了各 18．03。这很可能是由于单油精极性更强，并未完全分配于 种油类，发现LPL可以从多种油类中释放出甘油，从中等 有机相。 程度的饱和乙酰链 (椰子油)到长链的不饱和油类 (橄榄 油)尽皆囊括。我们在各组实验中加入等量的乙酰甘油，于 游离甘油和甘油骨架都不会造成分析混乱 是分子量越低，克分子数就越高。正如预期，低分子量的 由于我们所用的成色试剂能检测甘油，而甘油又是脂 油类，如椰子油和二乙酰甘油，造成较大的540nm波段光 肪水解产物和代谢中间物，所 以自然会想到，游离甘油可 吸收增加值。此外，为了估计LPL释放甘油的程度，在分 能会造成分析的混乱。为了确定游离甘油分配至有机相的 析系统中加入了相当于25_g三油精克分子数的甘油，发现 程度，除了加指定量的三油精之外，再将20ug游离甘油 (即 加入的甘油被检测出的程度与游离甘油和三油精相同，说 186ug=油精中甘油的克分子数)加至GPBS—EDTA中。加 明在这种分析中LPL几乎把全部三油精都水解成了甘油和 入的甘油只造成Y轴上的线移动0．0298光吸收单位，即相 油酸盐。 麓