甘蓝型油菜PEP基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建及转基因油菜的获得.pdfVIP

维普资讯 第 16卷第3期 激 光 生 物 学 报 Vo1．16No．3 2007年 6月 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Jun．2007 · 基础研究 · 甘蓝型油菜 PEP基因片段的克隆和种子 特异性反义表达载体的构建及转基 因油菜的获得 张 燕 ，刘桂珍 ，陈正华 ，安黎哲 (1．兰州大学生命科学学院，甘肃 兰州730000；2．甘肃亚盛集团博士后工作站北京分站，北京 100101) 摘 要 ：丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质／油脂含量比例的一个关键酶，抑制P 基因的表达，可提高 种子的含油量。本研究利用PCR法从甘蓝型油菜花油5号 (H045)克隆了PEP基因片段，并与载体pBI121-B构 建了反义PEP基因的种子特异性植物表达载体，通过激光微束穿刺法将其转化到甘蓝型油菜中，目前已获得了 转基因植株。 关键词 ：丙酮酸羧化酶；反义PEP；PCR；种子特异性表达载体；激光微束穿刺法 中图分类号：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：1007-7146(2007)03-0315-07 ‘ CloningofaSequenceEncodingPEP from Brassicanapusand ConstructingofGeneAntisenseSeed-specificExpressionVector andObtainmentofTransgenicBrassicanapusPlants ZHANG Yan ， Gui-zhen ，CHENG Zheng—hua ，AN Li-zhe (1．Schoo1ofLifeScienceofLanzhouUniversity，Lanzhou730000，Gansu，China；2．PostdoctoralScientific ResearchStation0ftheGansuYashengGmup，BranchStationofBeijing，Beijing100101，China) Abstract：Phosphoenolpyruvatecarboxylase(PEP)playsanimportantroleinthecontroloftheratiooftheprotein／lip。 idcontentinrape(Brassicanapus)．TomodifytheexpressionofP geneinrapebyCO-suppressionmayenhancethe oilcontentofthetransgenicplants．Inthisresearch．aP卯 genefragmentwasamplifiedfromHuayou5(H045)withpol- ymerasechainreaction(PCR)nadthenclonedintothecorrespondingsitesofthepBI121-Bintheantisenseorientation． AntisensePEP genewasintroducedintoBrassicanapussuccessfullyVialasermicrobeam puncture，andthetransgenic plantshadbeenobtained． Keywords：Phosphoenolpyruvatecarboxylase(PEP)；antisensePEP；polymerasechainreaction(PCR)；seed。spe。 cificexpressionvector；lasermicrobeam puncture 油菜是世界上最重要的油料作物之一，也是我 能源领域，此外，我 国石油资源十分贫乏，石油年 自 国主要的经济作物之一 ]。其油主要食用，目前中 给能力约为 1．3至 1．5亿千克，目前石油进 口量已