大豆异黄酮含量测定方法的研究.pdfVIP

中文摘要 大豆异黄酮含量测定方法的研究 摘 要 f大豆异黄酮因具有多种生理功能，其研究已成为一 个热门课题。体内外和流行病学研究结果显示，‘汰豆异黄 酮具有防治乳腺癌和结肠癌的作用，还可降低血胆固醇、 预防冠状动脉性心脏病，抗肝毒保肝、抗炎，还具有抗菌 及抗病毒作用、泻下作用、解痉作用等，有着非常广阔的 开发应用前景。 异黄酮可与多种显色剂反应，呈特定的颜色，可以 根据这些颜色反应对异黄酮进行定性鉴别和定量分析。目 前，对异黄酮含量测定的主要方法是HPLC法和Uv法， 国内的研究主要集中于异黄酮在自然界分布睛况，而关于 生产过程中如何快速、准确测定大豆异黄酮含量的方法， 国内仍未见报道。本文以特定的生产过程为背景，对此进 行了试验研究。 异黄酮有多种提取和分离方法，f比如：溶剂萃取法、 碱提取酸沉淀法、炭粉吸附法、柱层析法、梯度pH萃取 法等；1本文针对柱层析法的工业生产过程进行分析方法的 ／ 研究。 ， ／柱层析法工艺过程为：首先粉碎原料豆箔，然后用 80％酒精浸提，固液比为l：12~l：16，温度为32．55℃，过 滤得浸提液。将浸提液减压蒸馏，除去酒精，上聚酰胺吸 附柱，用20．80％酒精洗脱，将洗脱液蒸干即得大豆异黄 酮成品。在上述工艺过程中，需要检测的样品含量有：原 中文摘要 料豆箔含量、中间体样品含量(浓缩液含量、上柱泄漏样 品含量、洗柱液含量)与成品含量。 以上样品由于杂质多，成分复杂，对检测结果影响 较大。本试验首先对样品进行了适当的预处理，排除了杂 质的干扰。 第一部分高效液相色谱法测定大豆异黄酮总含量 目的：建立HPLC法测定大豆异黄酮含量。 方法：原料、中间体和成品样品首先经预处理，采用80％ 乙醇浸提并加热，使对测定结果影响大的蛋白质类变性， 然后通过离心或过滤的方式除去。预处理后的样品配制 tl 成合适浓度的溶液，用0．2111滤膜过滤后进行HPLC测定。 ODS柱(150×4．6mm，5lam)；流动相：甲醇：5％乙酸 后)；检测波长：254nm；检测灵敏度：O．08AUFS；柱温：50℃； pL：纸速：0．2crn／min。 进样量：10 本试验以外标法为基础，以峰面积进行定量分析。 采用黄豆苷和染料木素两种异黄酮苷作为对照品，标定总 M-Genistin，A-Genistin，Genistein的对照品。 结果： 以峰面积A与对照品浓度C进行线性回归分析， 2 中文摘要 结果显示在0．4．8mg／100ml范围内，线性关系良好，回归 Fig．1和Fig．2)。 在信噪比s／N=3时，黄豆苷的最低检测浓度为 料木素平均回收率为98．92％，RSD为0．77％(n=9)。 在原材料样品测定中，黄豆苷和染料木素的理论塔板 数分别为1156和1345，色谱峰均无前延和拖尾。 本文的HPLC图谱中异黄酮苷元吸收峰不明显，这 与有关文献报道一致，即大豆中基本不含异黄酮苷元。 结论：本文首次建立了样品预处理方法一采用8(PA乙醇 浸提去除杂蛋白，该预处理方法较文献报道的大为简便并 且提高了HPLC检测准确度。 本文首次建立了测定大豆异黄酮工业生产中各环节样 品含量的HPLC法。 该HPLC法测定原料、中间体和成品中大豆异黄酮含 量具有准确、可靠的特点，为生产过程的稳定控制提供依 据，并为改进工艺提供参考，具有可观的经济效益。 第二部分分光光度法测定大豆异黄酮总含量 目的：建立分光光度法测定大豆异黄酮的总含量。 方法：大豆异黄酮与1％A1C13溶液可发生定量络合反应， 生成黄褐色络合物。在420nm处测定反应后溶液的吸光 3 中文摘要 度，空白溶液为I％A1C13溶液与500／07,醇1：1混合液。 采用标准曲线法计算大豆异黄酮的含量。 结果：以吸收度A与对照品浓度c进行线性回归分析，