分子标记和DNA指纹技术在紫菜种质鉴定中的应用.pdfVIP

摘 要 摘 要 了紫菜是一种重要的经济型红藻，全世界都有广泛的分布，在我国紫菜产值位居海藻之首。长 期以来，生产中使用的紫菜品系大都是来自于野生种源。而目前对紫菜种质鉴定的方法还主要采 用传统的形态学方法，仍然处于比较落后的阶段，不能满足紫菜生产和科研的需求。因此，种质 问题长期以来一直是困扰紫菜生产的严重问题，也是开发和利用紫菜资源的重要限制因素，是生 产中OTA待解决的问题。为了防止或减少使用不合格无性系给紫菜生产造成的损失.建立一种准确 快捷的紫菜种质鉴定方法已成为当务之急。尹一一‘ 在本研究中，对我国主要应用的四类 (条斑紫菜Porphyrayezoensis，坛紫菜P.Haitanensis, 半叶紫菜P.Katadaivar.Hemiphylla和少精紫菜P.Oligospermatangia)15个紫菜无性系丝状体 用RAPD技术进行遗传多样性分T.I体中用8个Opero。引物可以扩增出稳定的可重复的图谱， 产物多态性比例高达70-97%，根据RAPD结果将 15个无性系聚类为3个群，此聚类结果与传 ilE-f}1L44#mg于丫 我们选取8个稳定性和重复性好的典型的多态性条带，用于构建紫菜无性系种质鉴定用的 DNA指纹图谱。这8个条带分别来自于引物OPJ-18和OPN-02的扩增结果。依据这8条带 在凝胶图谱中出现与否将RAPD扩增结果进行记录并转换成能为计算机所识别的语言，构建了 DNA指纹模式图和计算机化的DNA指纹，该图谱中的每一个无性系都具有能与其它无性系相 区分的DNA指纹，因此我们发展了一种基于计算机化指纹的紫菜无性系种质鉴定新方法，用该 方法为江苏紫菜良种场鉴定出的10个紫菜无性系，已通过国家鉴定，作为我国首批紫菜无性系 进入国家紫菜种质资源库，然后在此基础上设计了专门用于紫菜种质鉴定的计算机应用软件PhGI ((PorphyraGemiplasmIdentification)尹--Y.._. 另外.来自8个无性系8个特异的RAPD扩增产物被回收克隆，它们是有用的RAPD标记。 其中五个RAPD标记被测序，依据测序了的5末端碱基序列设计并合成了5对SCAR-PCR引物， 经反复摸索和比较，优化SCAR-PCR反应条件，对于无性系K9401和Y9502的RAPD特异标 记成功地转换成SCAR标记和STS标记。介中SCAR标记己经被用来指导紫菜的生产实践，” 且取得了显著的生产效益。这是首次将这种新型的分子标记由高等植物分子生物学领域引入并应 用到海藻分子生物学领域，并获得成功的实例。这些特异的分子标记对紫菜无性系种质鉴定、持 久合理利用以及产权保护具有重要意义。少一 指纹 关键词紫菜，种质鉴定，分子标记，DNA 本研究受国家海洋863J页目(819-03-02)和国家自然科学基金项目(资助 2 分子标记和DNA指纹技术在紫菜种质鉴定中的应用 ApplicationofMolecularMarkerandDNAFingerprinting TechniquesinGermplasmIdentificationofPorphyraLines Abstract Porphyraisoneofthemostimportantmarinealgae,whichhasaglobaldistribution andanimportanteconomicvalue.TheoutputvalueofPorphyrahasoccupiedthefirst rankofmarinealgaeinourcountry.Atpresent,themostPorphyralinesusedinproduce arecollectedfromnaturalworldandthemaintaxonomyisbasedonthemorphological characteristics.TheclassificationofPorphyralinesstillbehindsthetimes,itcannotmeet theneedsoftheproductionandresearchofPorphyra.Therefore,theissue