两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及其生物学功能研究.pdfVIP

两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备 及其生物学功能研究 研究生:樊一笋 导 师:张学光 摘 要 CD154,gp39)是一种分子量为33KDa 令D4。配体CD‘40L, 的II型跨膜糖蛋白，其基因定位于Xg26.3-Xg27.1，属于肿瘤坏死因 子 (TNF)超家族，主要表达在活化的CD4+T细胞和肥大细胞表面。 人们最初是通过高IgM综合征 (HIGM)认识CD40L在体液免疫应 答中的作用。HIGM免疫缺陷病发病机制为编码CD40L的基因发生 突变，使CD40L不能功能性表达、或致使CD40L不能与CD40结合， 主要表现为血清IgM的水平升高，IgG,IgA,IgE水平下降或完全 缺失。越来越多的研究表明，CD40/CD40L在特异性免疫应答中发 挥重要作用，通过CD40/CD40L的信号途径:(1)促使抗原递呈细 胞的有效活化，进而介导其分化、成熟，启动免疫应答的产生;(2) 活化T淋巴细胞，介导细胞免疫应答，参与记忆性T淋巴细胞的形 成;(3)促使B细胞的活化、增殖、分化、分泌Ig及类型转换，对 生发中心和记忆性B细胞的形成及维持起重要作用;(4)促进免疫 活性细胞分泌多种细胞因子 ((IL-1,IL-8,IL-12,TNF-a等)，参于 — 一fit一一里一一一一一一一一一一 免疫应答的调节。 业已报道，运用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40/CD40L，能有 效地抑制特异性免疫应答，减少特异性抗体和 CTL的产生，在自身 免疫、移植排斥、炎症等病理免疫反应中发挥重要作用。有报道， 抗CD40L单克隆抗体在小鼠自发性肾炎SNF1、小鼠糖尿病NOD. 实验诱导的胶原性关节炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE等自身 免疫病模型中，均能不同程度地减少自身抗体或自身反应性T细胞 的产生，缓解症状，延迟病程发展。同时，在皮肤、心脏、肾等小 鼠移植模型中，运用抗CD40L单克隆抗体能明显延长移植物的存活， 为移植排斥的防止和移植耐受的诱导提供了新方法。该单抗在基础 及临床免疫学中的应用前景已受到广泛关注。目前，世界上报道的 阻断型抗CD40L单抗仅三株，国内尚未见有关报道。鉴此，阻断型 抗CD40L单抗的研制不仅具有重要理论研究意义，而且还有潜在的 开发价值。于 . . 本研究以高表达人CD40L分子的小鼠成纤维转基因细胞为抗原， . . 采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫的小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细 胞SP2/0融合，通过荧光标记、竞争抑制、细胞核型分析和免疫印迹 等方发获得并建立两株识别不同抗原位点的鼠抗人CD40L单克隆抗 体的杂交瘤细胞株，分别命名为 1B1.4F1。经体外长期传代培养， 液氮冻存半年以上反复复苏良好，分泌特异性抗体性能稳定。 氏D4。分子表达在一些非免疫细胞如血管内皮细胞、胸腺内皮细 胞，、以及一些淋巴细胞性肿瘤病:卵巢癌、鼻咽癌、膀肤癌、慢性 淋巴细胞白血病 (CLL)、非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)、幼淋巴性白 血病 (PLL)及多发性骨髓瘤 (MM)等。文献报道，这些肿瘤细胞 与正常的免疫细胞不同，用抗CD40激发型单抗激发或CD40L转基 因细胞与表达CD40分子的肿瘤细胞相互作用，可导致其生长抑制甚 摘 要 至凋亡。由此，通过 Daudi细胞生长抑制试验