肿瘤热休克蛋白70―抗原肽复合物抗移植瘤的实验研究.DOCVIP

临床医学论文-肿瘤热休克蛋白70―抗原肽复合物抗移植瘤的实验研究 ??????????????? 作者：张树波 董驹 马立人 王国臣 陈志全 郑毛根 【关键词】? 肿瘤热 ?【摘要】 目的 研究肺腺癌有效的治疗方法。方法 采用提纯小鼠肺腺癌LA795细胞热休克蛋白抗原肽复合物，对小鼠背部LA795肺腺癌移植瘤进行治疗。结果 免疫组和免疫+化疗组移植瘤重量明显减少，小鼠生存期明显延长。结论 热休克蛋白70抗原肽复合物有强大的抗肿瘤免疫原性，保护实验动物免受肿瘤细胞的攻击，抑制肿瘤细胞的生长，延长动物生存期。 关键词 热休克蛋白70 抗原肽复合物 移植瘤 【Abstract】 Objective To explore an effective recipe for pulmonary adenocarcinoma.Methods The mice which LA795were injected subcutaneously in the right back，were treated by purification of HAC70from mouse pulˉmonary adenocarcinoma LA795.Results In the immunized group and the combined immune and chemical therapy group，the mouse survival periods were prolonged.Conclusion HAC70is of powerful antineoplastic immunogenicity，which protects experimental animals from attacks of tumor cells，inhibits the growth of tumor cells，prolongs animal surˉvival periods. Key words heat shock protein70 antigen peptide complex transplant tumor 为了寻找一种治疗肺腺癌有效的方法，我科自2000年9月～2003年10月对小鼠LA795肺腺癌细胞热休克蛋白70抗原肽复合物（HAC70）进行提纯扩增，并对种植LA795肺腺癌细胞的T739雌性近交系小鼠进行包括HAC免疫治疗在内的各种治疗的动物实验，取得良好的治疗效果。现报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 小鼠肺腺癌细胞标LA795;中国协和医科大学基础研究院提供。T739雌性纯系小鼠（6～10周龄）;中国医学科学院肿瘤研究所动物研究中心提供。RPMI-1640，AmohotericinB，GIBCO公司产品。Hepes，BSA，SDS.Acr.Bis.Coomassie brilliant blue R-250。PMSF，ADP-Agarose，ADP二钠盐，2-Me，TEMED，抗小鼠HSP70单抗;SIGMA公司产品。DeAe-52;WHATMAN公司产品。SephdexG-200;PARMACIˉA公司产品。羊抗鼠IgG:ROCKLAND公司产品。Aprotinin;BOEHRINGER公司产品。DTT:PROMEGA公司产品。MTT，USB公司分装。低分子量标准蛋白质MARRER;天津TBD生物技术发育中心提供，中国科学院上海生化所产品。胎牛血清:天津生物技术发育中心提供。小鼠HSP70单克隆抗体:SANTA CRUZ BLOTOCHNOLOGY公司产品。 1.2 方法 1.2.1 小鼠肺腺癌LA795细胞HAC70的提纯 体外培养LA795细胞，获得约16g湿重细胞。经低渗、反复冻融、机器震荡后破碎细胞。通过ADP-AGAROSE亲和层析，DeAe-52离子交换层析、透析、离心及蛋白浓缩而获得蛋白质。再经SDS电泳，WESTERN-BLOTS进行定性及纯度检验，证明为HSP70，通过CBB法测定蛋白浓度。 1.2.2 肿瘤模型的制备及实验分组 在96只雌性T739近交系小鼠右背皮下注射2.5×10 6个/ml LA795小鼠肺腺癌细胞悬液0.2ml以制备肿瘤动物模型，随机分为预防组、早期治疗组、晚期治疗组三大组，每大组32只小鼠。每大组再分为对照组、免疫组、化疗组、免疫+化疗组四个亚组，分别标为A、B、C、D组。预防组、早期治疗组、晚期治疗组分别在接种肿瘤细胞前14天、7天、接种肿瘤细胞当天及接种后7天、接种肿瘤细胞后10天、17天给予治疗。其中A组小鼠皮下注射PBS溶液0.2ml/只;B组小鼠皮下注射HAC70溶液0.2ml/只，即100μg/只;C组小鼠腹腔注射环磷酰胺溶液剂量为60mg/kg;D组小鼠皮下注射HAC7