RNA干扰抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达.pdfVIP

中文摘要 中文糖要 RNA干扰技术抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达 在血管增生的过程中起着举足轻重的作用。在生理条件下，除了创伤修复和女性子 宫的周期性变化外，成人是几乎不存在微血管生成的。但是，在胚胎发育阶段，微 血管生成的作用是相当活跃和丰富的，这种作用于胚胎的发育和分化有着密切的联 系。然而在病理状态下，许多疾病都伴随着微血管生成作用的发生。在肿瘤生成的 过程中，微血管生成作用是非常重要的，在上个世纪80年代，Folkman首先提出了 微血管生成的概念，他和他的同事经过多年的研究，发现了许多与微血管生成相关 的生长因子和细胞因子，并且阐明了微血管生成在肿瘤生成过程中的重要作用。在 肿瘤生长的过程中，肿瘤实体细胞需要大量的营养成分和氧气，在肿瘤发生初期， 这些营养成分和氧气是通过直接扩散的作用从邻近的血管或者是组织向其渗透的。 但是，随着肿瘤的不断生长，仅仅依靠直接渗透作用是不足以支持肿瘤实体细胞的 营养消耗的，肿瘤需要更多的氧气和营养成分。研究表明，一个没有内部血管供应 的肿瘤最大只能生长到1～2ram。不幸的是，肿瘤细胞已经产生了一种机制来帮助其 获得更多的氧气，这就使微血管生成。微血管生成是在现有的血管床的基础上发生 的，向目的区域进行微血管生长的一个机制。研究已经证明了多种肿瘤细胞都具有 分泌促微血管生成的生长因子和细胞因子。而在这些细胞因子和生长因子中，血管 内皮生长因子(VEGF)无疑是最重要的一个。血管内皮生长因子是一个23．kd的多肽， 通常以二聚体形式存在于体内，它具有强烈的丝裂原作用，可以促进内皮细胞的生 长和迁移。血管内皮生长因子在整个微血管生成的过程中，是一个中枢性的因子， 它能被多种因素调节，如生长因子，细胞因子，一些大分子物质以及癌基因。所以 目前许多研究抗微血管生成的研究都把血管内皮生长因子作为了作用的靶点。 微血管生成在不但在肿瘤的发生过程有重要作用，在肿瘤的转移过程中，其作 用也是不可忽视的。在外科的临床实践发现，转移瘤的发生通常是在摘除了母瘤之 后产生的。这难道仅仅是～个偶然现象?研究发现，这个现象与微血管生成作用的 调节平衡有密切关系。肿瘤细胞不但会分泌促进微血管生成作用的生长因子和细胞 因子，其也会产生少量的抗微血管生成的因子。但是在母瘤里，由于促微血管生成 的因子含量远远高于抗微血管生成因子的含量，所以肿瘤得以继续生长。然而，这 时潜伏在身体其他部位和组织的转移瘤却被母瘤分泌的抗微血管生成因子抑制着， 管生成的因子也随之消失，子瘤没有这种抑制机制的存在，得以继续生长。 目前，抗肿瘤微血管生成的治疗方法以及药物已经逐渐得以临床应用，并取得 RNA干扰技术抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达 了一定的疗效。最典型的药物就是上世纪六十年代在日本造成胎儿畸形而被停用的 “反应停”。“反应停”可能导致胎儿的发育畸形，四肢发育不完全，产生“海豹足”， 这种畸形的产生就是因为该药物抑制了胚胎发育阶段的微血管生成作用而产生的。 但是这些方法的作用靶点通常都是在微血管生成作用中的一些蛋白分子，如血管内 皮生长因子，血管内皮生长因子受体等。这并不能从较根本的水平抑制微血管生成 的作用。 基因水平的治疗因此被列入了研究范围之中。但是肿瘤导致的基因突变通常是 多靶点的。首先，人们很难确定到底有多少基因突变在肿瘤发生过程中起了作用， 其次，全部抑制或修复所有的基因突变在目前的科学水平还是不可行的。所幸的是， 1998年，Fire和他的同事们在一次很偶然的实验中发现了RNA干扰现象。其实， 在更早的时候，RNA干扰的现象已经在植物中作为一种植物自身抗病毒的机制而被 被揭开。现在RNA干扰已经逐渐成为一种常规的基因“敲除”的手段。RNA干扰在 肿瘤治疗方面的研究也取得了重大的进展。已经有许多文章报道了用RNA干扰的 方法抑制血管内皮生长因子的表达，我们实验小组也在致力于这方面的研究，并且 取得一定的成果。体外实验表明RNA干扰能够抑制90％以上的VEGF表达，以及 接近100％的蛋白水平表达。这显然是一个很有前途的治疗方式。但是目前仍有几 个难题摆在面前：第一，siRNA的稳定性；第二，siRNA表达系统的安全性；第三， 体内转染系统的效率已经安全性；第四，给药方法。RNA是一种较不稳定的分子， 虽然化学修饰的方法在一定程度上提高了siRNA的稳定性，但是在体内存在众多酶 的环境下，siRNA的作用时间仍然不够理想。于是有人采用构建siRNA表达系统通 过腺病毒，反转录病毒或是慢病毒导