异丙酚对兔心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因核转录因子NF-κB影响.pdf

中文摘要 异丙酚对兔心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及 B的影晌 凋亡相关基因核转录因子NF．K 摘 要 目的：心肌缺血再灌注损伤(mvocardiali§c耻mia— reperfusion 体外循环下心内直视手术I器官移植、心肌梗塞、脑卒巾、 失血性休克等，都存在着缺血再灌注损伤。如何有效地预防 和控制这一过程对临床工作有着非常重要的意义。缺血再灌 注损伤的机制比较复杂，涉及多个环节，目前有许多学者从 不同的角度和途径做探索和研究。其中，缺血再灌注过程中 产生的自由基对核转录因子NF．1(B的激活，进而引起细胞凋 亡，这可能是很重要的一个途径。 核转录因子(nuclear factor)是一类蛋白质， transcription 具有与某些启动子(promotor)区的固定核苷酸序列结合， 从而启动基因转录的功能。核转录因子NF．出是一组重要的 中检测到一种能与免疫球蛋白K轻链基增强子一段10bp的 核苷酸序列(GGGA唧CC)特异结合的核蛋白，称之为 NF．KB。后来发现NF．KB的结合位点在许多基因的启动子中 都存在，并非为B淋巴细胞所特有。近年发现NF．1(B在心 肌缺血再灌注损伤中具有独特作用。NF．1cB是一种氧化应激 反应性核转录因子，在缺血再灌注损伤的过程中，随着大量 活性氧及其他相关因子在再灌注过程中的流入而被激活。激 活的NF．1(B随后转入细胞核内，通过诱导P53、C．mvc、 中文摘要 Fas／Apo．1等促凋亡基因的表达和抑制抑凋亡基因Bcl．2、 Bcl—xl等的表达而产生促凋亡作用。自由基清除剂能通过抑 制自由基对NF—KB的激活，从而抑制促凋亡基因的表达，增 强抗凋亡基因的表达，具有抗细胞凋亡之作用。 异丙酚作为一个被广泛应用的静脉麻醉药，具有许多的 优点，是目前临床上较为理想的静脉麻醉药之一。；其结构中 本身含有的一OH具有类似内源性维生素E的作用，可消除缺 血再灌注过程中产生的自由基。如果异丙酚具有抗细胞凋亡 而对缺血再灌注损伤有保护作用，那么更增加了它的临床使 用范围和安全性，其抗氧化作用的结构基础也正是这种类似 的酚羟基结构。异丙酚可直接与自由基反应，生成：2，6．二 异丙基苯氧基团，同时使自由基灭活。异丙酚主要的抗氧化 机制是抑制自由基介导的脂质过氧化反应，其主要干扰了脂 质过氧化的夺氢过程，形成的酚基进一步与脂质过氧化基反 应形成一个更稳定的无活性的产物，中断了脂质过氧化的链 式反应。同时异丙酚良好的脂溶性使其更易积聚在细胞膜的 脂质双层膜上，从而提高细胞抗氧化损伤的能力。Kokita等 【2】认为异丙酚在和蛋白质结合时仍能发挥抗缺血再灌注损伤 作用。而离体实验证明异丙酚有拮抗自由基的作用，并减少 缺血的脑组织兴奋性氨基酸释放【3】。近些年有些学者在这方 面已做了一定的研究和探索。但同时观察异丙酚抗凋亡和抑 制NF．KB表达的文献少有报道。本研究旨在论证异丙酚的抗 凋亡和同时抑制NF一1(B表达之作用。 方法：30只雄性新西兰家兔随机分为3组，采用左冠状 动脉前降支扎紧松扎法制造缺血再灌注损伤模型。假手术 (sham)组(n=10，对冠状动脉前降支仅穿线，不做扎紧松 中文摘要 注2h，其中异丙酚组术前30min经耳缘静脉泵注异丙酚 20mg／1(跏至再灌注2h。再灌注结束时，处死动物，取结扎 线以下的左心室游离壁及心尖部，置于10％福尔马林固定， 石蜡包埋，依左室长轴于中部开始，在石蜡切卢；．机下进行连 续石蜡切片，．层厚4um，取连续四张邻片进行展片，共展四 套切片，分别用于HE染色，NF．KB，细胞凋亡免疫组化染 色及阴性对照。 NF—KB测定免疫组化染色均在细胞浆及核内表达， 阳性反应均为棕黄色或黄色，结果采用图像分析系统，每张 切片随机选取5个视野计算阳性细胞光密度值(optical deIlsity，0D)。 TUNEL法检测细胞凋亡在细胞凋亡过程中，形成了 基因组DNA片段和高分子量的单链DNA断端(缺口)，这 些DNA链缺口可以利用酶标记核苷酸3’．OH末端方法来识 别。在此试剂