表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用.pdfVIP

第 l2卷 第2期 2012年 1月 科 学 技 术 与 工 程 Vo1．12 No．2 Jan．2012 1671— 1815(2011)2-0415—03 ScienceTechnologyandEngineering ⑥ 2012 Sci．Tech．Engrg． 医药卫生 表达 HBHA和 hIL．12融合蛋白的重组耻垢分枝 杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用 赵善民 张彩勤 赵 勇 毛峰峰 白 冰 张 海 师长宏 徐志凯 (第四军医大学实验动物中心 ，微生物学教研室 ，西安710032) 摘 要 评价表达HBHA和hiLl2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果。结核分枝杆菌H37Rv感 染小鼠4周后，用表达HBHA和hiLl2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗，检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。重组耻垢分 枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量，减轻病理损伤。但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物。表达ItBHA和hiLl2 融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖，可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗。 关键词 重组耻垢分枝杆菌 结核分枝杆菌 HBHA hlL一12 中图法分类号 R378．91； 文献标志码 B WHO公布的数据显示，全球约 1／3的人感染结 hiLl2一rMS由第四军医大学实验动物中心提供。 核分枝杆菌 ( tuberculosis，MTB)。每年新发结核 1．2 小鼠的结核分枝杆菌感染 病人约 800—1000万，每年约有 300万人死于结核 采用尾静脉注射的方式，用 MTB毒株 H37Rv 病 J。目前结核病的治疗主要依赖于化疗药物，但 攻击6～8周龄雄性SPF级BALB／c小鼠，每只小鼠 该类药物的大量使用容易导致耐药株的产生。特 感染剂量为 1×10CFU。 别是出现多重耐药株 (MDR．TB) 的暴发流行和 1．3 感染小鼠的治疗 严重危害，迫使人们不得不去思考新的治疗策略， 感染4周后 ，随机抽取4只确定小鼠体内MTB 其中免疫调节剂的使用是 目前较有前景的治疗策 感染状况，将剩余24只感染小鼠随机分为4组：第 略。本研究中，我们将构建的表达肝素结合血凝素 一 组在感染后第 4周和第6周分别腹部皮下注射 与人 IL一12融合基因的重组耻垢分枝杆菌 (HBHA— 1×10CFU的耻垢分枝杆菌 (MS)；第二组在感染 hiLl2一rMS)[33用于MTB感染小 鼠的免疫治疗 ，评价 后第4周和第6周分别腹部皮下注射 1×10CFU 其治疗效果，为其用于结核病的治疗研究奠定基础。 的重组耻垢分枝杆菌 (HBHA—hiLl2一rMS)；第三组 1 材料与方法 从第4周到第 8周用异烟肼 (INH，54．25mg／L)联 合利福平 (RFP，52．5mg／L)连续饮水 1个月；第四 1．1 材料 组在第4周和第6周分别腹部分别皮下注射生理盐 MTB的H37Rv株 (陕西省结核病防治研究所 水对照。流程如图1所示 。 王瑞惠赠)，7H9液体和 7H10固体培养基 (美 国 Difco公司)。分枝杆菌培养增强剂分枝杆菌培养增 数 强剂 ADC和OADC购 自德国BecktonDickinson公 司。RPMI1640培养基购 自美国Gibco公司。6～8 周龄雄性 SPF级 BALB／c小 鼠28只由第 四军医大 0 2 }4腑6 8周t 学实验动物中心提供。重组耻垢分枝杆菌 H