芡实及其近缘种药材ITS2条形码鉴定研究.pdfVIP

2013 第十五卷 第三期 *Vo1．15No．3 摘 要：目的：应用 I1’s2条形码鉴定芡实及其近缘种药材。方法：提取 20份芡实及其近缘种药材 样品基因组 DNA，通过 PCR扩增 ITS2序列并双向测序 ，测序后用Sequin12．3提交至 GenBank；从 GenBank上下载所有芡实及其近缘种 3O种 102条 ITS2序列 ；对提交与下载的 122条序列，应用 MEGA5．1软件进行序列比对，计算种 内和种间距离，采用相似性搜索法、最近距离法进行鉴定分析， 并构建NJ系统进化树直观反映鉴定结果。结果：芡实药材 ITS2序列长度均为214bp，为 1个单倍 型，与其近缘种之间遗传距离较远，NJ树结果显示芡实及其近缘种药材可明显区分开，表现出良好的 单系性。结论：ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确地鉴别芡实药材，为保障临床安全用药提供了 新的技术手段 ，为拓宽 DNA条形码技术在 中药鉴定中的应用进行 了新的探 索。 关键词 ：芡实 ITS2 物种鉴定 doi：10．11842／wst．2013．03．012 中图分类号：R282．5 文献标识码：A 芡实 (EuryalesSemen)为睡莲科水生植物芡 补中益气 、开 胃止渴、延缓衰老等作用，营养和经济 (EuryaleferoxSalisb．)的干燥成熟种仁 ，是芡属下的 价值较高，可药食两用 【．6】。 唯一种 ，始载于 神《农本草经》，列为上品，有 “苏芡” DNA条形码 (DNAbarcoding)技术 由加拿大分 和 “刺芡”之分 ，刺芡又称北芡 ，多分布在 中国南方 类学家 Hebert于 2003年首次提出，它是利用一段 浅水湖泊和沼泽中，苏芡又称南芡，为苏州地区的特 短的、标准的DNA片段对物种进行快速 、准确的鉴 色栽培品种 一【。芡实具有益。肾固精、补脾止泻、祛湿止 定7【]，作为新兴的现代生物鉴定方法，倍受国内外研 带的功效，主治 白浊、带下、遗精、小便不禁等[3]。现代 究者关注[8]。在中药 DNA条形码鉴定研究中，ITS2条 研究表明，芡实含有丰富的蛋 白质 、氨基酸 、黄酮 、 形码的鉴定能力已经得到了研究者的广泛认可 挖】。 不饱和脂肪酸及多糖等多种成分I4151，具有滋养强壮 、 Chen等 [9]于 2010年 比较分析了6600个植物样本 的7个候选 DNA条形码 (psbA—trnH，matK，rbcL， 收稿 日期 ：2013—05—24 rpoC1，ycf5，ITS2，ITS)对药用植物鉴定的有效性 ，首 修回日期：2013—06—04 ★ 科学技术部国家科技支撑计划(2011BA140B06)：芡实等8种大宗中药材质量标准提高及其综合利用研究，负责人：吴启南；江苏省 “青蓝工程” (2012)，负责人：谷巍。 ★★ 通讯作者：昊启南，博士生导师，主要研究方向：中药资源学。 404 [WorldScienceandTechnology~ModernizationofTraditoinalChineseMedicineandMateriaMedica] 世界科学技术一中医药现代化★专题讨论之一：中药资源与鉴定 次提出将 nrDNA ITS2序列作为药用植物标准DNA 芡，KC573859～KC573870为刺芡。同时我们在 Gen— 条形码。目前，ITS2的鉴定效率已在多个科属基原 Bank数据库下载芡实及其睡莲科近缘物种 30种 植物及药材的鉴定 中得到了验证 ，其在 中药鉴定 102条 ITS2序列 ，实验材料信息见表 1。 中的应用推广将可能是生药鉴定方法 的革命性 二、方 法 突破[10-15】。 本研究以芡实及其近缘种药材为研究对象获 1．DNA提取、PCR扩增及测序 得 ITS2序列，以验证 DNA条形码对芡实及其近缘