大鼠中枢神经系统体内基因转染及功能蛋白表达的实验研究.pdfVIP

中国骨伤 2012年 1月第25卷第 1期 ChinaJOrthopTrauma，Jan．2012，Vo1．25。No．1 ·47 · · 基 础 xOt-究 · 大鼠中枢神经系统体内基因转染及功能蛋白表达 的实验研究 李琦 ，曾炳芳，徐建广 ，孔维清 (上海交通大学附属第六人民医院，上海 200233) 【摘要】 目的：通过实验进一步探讨局部应用神经生长因子的途径和方法。方法：24只SD大鼠共分为实验组和 对照组 (每组 12只)。腹腔麻醉后 ，俯卧位切开胸椎椎板 。用微量注射器，分别对其进行经DOTAP转染的含报告基 因 质粒 (实验组)和空载体一脂质体粒 (对 照组)的鞘 内直接注射 。术后2周处死动物 ，取相应节段脊髓组织行 RT—PCR及 免疫组化检测。结果 ：免疫组化发现 ，在实验组脊髓组织胶质细胞及神经元 中可见 beta一半乳糖苷酶阳性染色。同样 ，在 相 同组织RT—PCR检测到LacZmRNA。而对照组无上述阳性发现。结论 ：外源性基 因于体 内神经组织 中有效转染是 目 前治疗脊髓损伤 的热点。通过上述技术将特定神经生长 因子输入局部损伤 区域 ，有助于促进 中枢神经再生，避免早期 继发损伤 。 【关键词】 基因； 转染； 脊髓损伤； 注射，脊髓； 动物实验 DoI：10．3969／i．issn．1003—0034．2012．01．013 Transfectionofexogenousgene：LacZintospinalcordofSDratsanditsproteinexpression：aninvivostudy LIQi， ZENGBing-fang，XU~on-guang，KONGWei-qing．ShanghaiNo．6People HospitalofJiootongUniversity，Shnaghai200233， China ABSTRACT Objective：Toexploreawayofthegenetherapyforacutespinalcordinjury(ASCI)byvivotransfectionofex— ogenousgeneintospinalcordtissue．Methods：Twenty—fourratsofSD weredividedintoexperimentgroupandcontrolgroup (eachgrouphad12rats)．Afteranaesthesiabyabdominalcavity，laminaofthoracicvertebraofallratswerecut·openinprone position．Complexofplasmidandreportgene—LacZ．andplasmidwithoutreportgene—LacZwererespectivelyinjectedinto cavumsubduralofSDratsofexperimentgroupandcontrolgroupbycationliposome (DOTAP)encapsulation．Theratswere killedatthe2ndweekafteroperation，spinalcordtissueofinjectedsegmentsweredetectedbyreversetranscription—poly— merasechainraction(RT—PCR)andimmunohistochemistry．Results：Inexperimentgroup，positivestainingofB—galactosidase canbeclearlyobservedinneuronandgliacellofratsspinalcordbyimmunohistochemistry detection．LacZmRNAinsame areawasalsodetectedbyRT-PCR．But，incontrolgroup，noabove—mentionedpositiveresultswerefound．Conclusion：Effec— tivetransfeetionofexogenousgeneinvivointospinalcordisanewhotspotfortreatmentofSCI．Thuscertainnervegrowt