树突状细胞瘤苗抗脑胶质瘤作用的体外实验研究.pdfVIP

中文摘要 树突状细胞瘤苗抗脑胶质瘤作用的体外实验研究 摘 要 目的：胶质瘤的主动免疫治疗(active immunotherapy)已 成为胶质瘤治疗研究的热点，而免疫反应首先是由抗原递呈 cell，APe)捕获抗原，经其加工、处 细胞(antigen．presenting 理后将抗原信息传递给淋巴细胞，从而诱发特异性免疫应 cell，DC)是体内功能最强的专职抗 答。树突状细胞(dendritic 原递呈细胞。因此本实验通过培养树突状细胞制备肿瘤疫 苗，进一步探讨胶质瘤瘤苗体外的抗肿瘤作用。 方法：将体重100．1509雌性SD大鼠脱颈处死，在无 菌条件下取双侧股骨和胫骨，剪除两端软骨组织达骨髓腔， 用培养液充分冲洗骨髓腔，200目尼龙网过滤后离心，弃上 清。去除红细胞。用PBS及无血清IMDM培养液洗涤，弃 上清。加入含20％胎牛血清IMDM完全培养液培养。第8 天收获成熟的树突状细胞。扫描电镜观察、流式细胞免疫学 检测树突状细胞。采用冻融法制备肿瘤抗原。取对数生长期 的C6肿瘤细胞，消化、吹打均匀并计数，移入冻存管，冻 存于-70℃低温冰箱。次日，将其置于室温下融化，而后再次 放入一70℃低温冰箱，反复冻融4次，离心30分钟，吸取上 清液，-70C保存。在树突状细胞培养皿中加入冻融抗原培 养48小时。将20只SD雌性大鼠随机分为4组，每组5只 动物：(1)C6肿瘤疫苗1组：将C6肿瘤抗原致敏的树突 状细胞连续3周每周1次注入每只动物尾静脉，第3次注射 后l周进行实验。(2)C6肿瘤疫苗2组：将C6肿瘤疫苗 中文摘要 致敏的树突状细胞注入每只动物尾静脉，注射后1周进行实 验。(3)树突状细胞组：将培养8天的树突状细胞连续3 周每周1次注入每只动物尾静脉，第3次注射后1周进行实 验。(4)对照组：每次每只动物尾静脉注射生理盐水lml， 每周一次，连续3周，第3次注射后1周进行实验。无菌条 件下取出实验动物脾脏，洗去血迹，剪去脂肪及筋膜组织， 于200目钢网上研磨组织，将组织细胞悬液置于淋巴细胞分 离液上，离心，获取淋巴细胞。MTr法检测淋巴细胞杀伤 活性，计算杀伤效率。 结果：倒置显微镜下第1天可见髓单核细胞及少量的幼 稚红细胞；第3天换液后红细胞成份消失，髓单核细胞明显 增加，细胞己贴壁；培养的大鼠骨髓细胞第5天出现树突样 细胞；第7、8天可见到大量有长的细胞突起的树突状细胞。 扫描电镜观察可见未成熟树突状细胞体积较小，圆形或椭圆 形，表面有少量细胞突起；成熟树突状细胞为圆形或椭圆形， 表面有大量细胞突起，其突起末端又有细小的分支。流式细 胞学检查显示OX62表达阳性率为90．39％，OX6表达阳性率 为85．31％。计算各实验组、不同效靶比的OD值，应用SPSS 软件进行统计学处理，在C6肿瘤疫苗1组的各效靶比的 OD值之间有统计学差异(p0．01)，其他各组内不同效靶比 的OD值之间只有10：1与2．5：1之间有统计学差异 (p0．01)。在不同实验组的相同效靶比之间进行比较，C6 肿瘤疫苗l组、C6肿瘤疫苗2组与其他各组之间有统计学 差异(p0．01)，树突状细胞组与对照组之间无统计学差异 (p0，01)。 结论：提取大鼠骨髓细胞，在含有GM．CSF和IL．4的 中文摘要 完全培养基中可培养出具有高度免疫活性的树突状细胞。树 突状细胞摄取肿瘤抗原后，可激发大鼠体内的肿瘤特异性免 疫反应，明显增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。将成熟 的树突状细胞注入大鼠体内后，体内淋巴细胞抗肿瘤活性未 见明显增强。一次向大鼠体内注入树突状细胞肿瘤疫苗，体 内淋巴细胞抗肿瘤活性稍有增强；多次向体内注入树突状细 胞肿瘤疫苗，体内淋巴细胞抗肿瘤活性明显增强。 关键词：胶质瘤；免疫治疗；树突状细胞；肿瘤疫苗； 冻融抗原 英文摘要 Invitro researchofthe experiment