周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂%2f3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究.pdfVIP

簋三届佳染瘤防控基础研究与应田技丞论坛 周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基 因真核表达载体的构建及DNA免疫研究 方政陆施娟张赛楠王慧方浩童海燕徐邦生 基金项目：江苏省高校研究生科研创新计划项目(No．2011653)南通市应用研究计划项目 (No．K2009027) 作者单位：南通大学医学院寄生虫学教研室226001 l：fznt@163．com 通信作者：方政，E-mai 【摘要】 目的 构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱 氢酶重组复合基因(BmCPI／GAPDH)真核表达质粒，观察其在小鼠体内的细胞免疫 应答效应。方法依据公布的BmCPI及BmGAPDH基因序列设计引物，以周期型马来 后，与pGEM-TEasy克隆载体连接，筛选出阳性克隆。经PCR和双酶切鉴定后， 酶切，将酶切后的载体和目的片段进行连接，构建真核重组表达质粒 经后腿胫前肌免疫BALB／c小鼠，并设正常对照组及空质粒对照组，共免疫3次， 每次免疫间隔2周。 用RT—PCR方法检测肌肉组织内目的基因：用MTT、ELISA方法分别检测免疫小鼠T 淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子INF—Y、IL-4水平。结果成功构建了 后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。免疫小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于 体能在小鼠体内表达并可有效诱导特异性细胞免疫应答。 【关键词】 周期型马来丝虫；半胱氨酸蛋白酶抑制剂；3一磷酸甘油醛脱氢酶； 复合基因；DNA免疫 197 箍三届佳染病防控基础研究与应用技本论坛 ConstructionofpcDNA3．1(+)一BmCPI／BmGAPDHeukaryotic recombinantandobservationonDNA plasmid immunity FANG Zheng，LUShi—juan，ZHANGSai—nan，WANGHui，FANGHao，TONG Hal—yan，XUBang—sheng． of ofBasicMedical DepartmentParasitology，SchoolSciences，NantongUniversity， Nantong226001，China author：FANG Corresponding Email： fznt@163．com Zheng， [Abstract] Toobservetheimmune elicitedin Objective responses BALB／cmiceaDNAvaccine．The by eukaryotic expressionplasmidscontaining inhibitorand cysteineprotease (CPI) from iodic dehydrogenase(GAPDH)geneper Brugia clonedintovector TotalRNAwasextractedfrom pcDNA3．1．Methods periodic BmCPIandBmGAPDHwas ifi Brugiamalayi．The