骨碎补预防糖皮质激素性骨质疏松症的代谢组学研究.pdfVIP

骨碎补预防糖皮质激素性骨质疏松症的代谢组学研究 梁佳佳刘心昱鲁悦娟鹿秀梅李发美熊志立木 沈阳药科大学药学院 摘要：目的：建立基于UPLC．MS技术的大鼠肾组织的代谢组学分析方法，并用于糖皮质激素 性骨质疏松症模型大鼠以及骨碎补干预后肾组织代谢物谱研究，结合模式识别方法进行分类 和寻找生物标志物，探索骨碎补预防糖皮质激素性骨质疏松症的作用机制。方法：健康雄性 Wistar大鼠随机分为正常组，模型组和给药组。除正常组外，均采用肌肉注射高剂量强的松龙 的方法建立糖皮质激素性骨质疏松症大鼠模型，给药组同时每天灌胃给予骨碎补，12周后将 所有大鼠处死，取肾组织进行分析。结果：所建立的方法能成功的将空白组和模型组大鼠区 分，模型组大鼠’肾组织中苯丙氨酸、溶血磷脂酰胆碱类、鞘氨醇类的水平显著升高(pO．05)。 三组大鼠的得分矢量图明显的显示出了给药组大鼠肾组织代谢轮廓向正常对照组恢复的趋 势，差异代谢物水平与正常对照组大鼠没有显著性差异。结论：糖皮质激素性骨质疏松症模 型大鼠肾组织中这些代谢物水平的变化提示可能存在氨基酸代谢紊乱，体内氧化．抗氧化作用 失衡，以及一定程度的细胞凋亡和组织损伤；而骨碎补则可通过调节氨基酸代谢，氧化．抗氧 化平衡，减少细胞凋亡和组织损伤起到预防糖皮质激素性骨质疏松症的作用。 关键词：骨碎补；代谢组学；糖皮质激素性骨质疏松症；超高效液相色谱．质谱联用；肾组织 骨质疏松症是一种骨代谢疾病，以骨量减少、骨微结构损害、易发生骨折为特征111，已经成为 一个世界范围的、日趋严重的影响健康的重要问题。骨碎补为水龙骨科植物槲蕨(Drynaria fortuner(Kunze)JSm)的q：-燥根茎，是广泛应用于补肾壮骨的传统中刻21。代谢组学是定量描 述生物内源性代谢物质对病理生理刺激或遗传修饰等变化应答规律的科学。代谢组学强调把 人体做为完整的系统来研究，能够从代谢网络终端表象的整体角度反映生物体的功能水平， 具有整体、动态、综合分析的特点，与中药“多组分、多靶点、整合调节作用’’的特点相吻合【3，41。 本课题组Liu等【5】采用代谢组学的方法对中药骨碎补预防糖皮质激素性骨质疏松症的作用机制 进行了血浆代谢组学研究。鉴于上述研究背景，根据代谢组学在中药作用机制研究方面的有 利优势，本研究拟采用代谢组学策略，欲通过比较空白大鼠与骨质疏松症模型大鼠肾组织 UPLC．MS代谢物谱的变化，寻找与糖皮质激素性骨质疏松症相关的肾组织标志物，通过正常 对照组、模型组以及给药组三者之间的比较，找到骨碎补预防糖皮质激素性骨质疏松症作用 的肾组织作用靶点。 1．仪器与试剂 1．1仪器 作者简介：梁佳佳(1989-)，女，硕士研究生，-丰要从事中药代谢组学研究。Tel：(024)2396290， E-mail：liangjiajia0229@163．com +通讯作者：熊志立(1973．)，女，副教授，博-上，主要从事中药药效物质基础及中药代谢组学研究。 216 API质谱仪(美国 ACQUITY超高效液相色谱仪(美国Waters公司)，WatersQuattromicro Waters公司)，马福炉44L1．V(德力西集团仪器仪表有限公司)，断裂仪(上海黄海药检仪 器厂)，双能X射线骨密度仪(NORLAND)，全自动化学发光免疫分析(西门子公司)，全自 动生化分析仪(日立公司)。 1．2试剂与药材 (纯度98．81％)(武汉顺达精细化工有限公司)，双缩脲试剂盒(南京建成生物工程研究所)， 蛋白质羰基试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 骨碎补药材(购自沈阳维康大药房，产于云南)经沈阳药科大学药用植物教研室路金才教授 鉴定为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J．Sm．的干燥根茎。 2．实验方法 2．1骨质疏松症大鼠模型的建立 证号SCXK一(军)2007．004)，适应性喂养l周后，随机分为正常对照组，模型组，给药组。除 正常对照组外，每组大鼠按15 mg／kg肌肉注射强的松龙，每周2次，持续12周。实验期间动 物自由进食饮水。在模型复制的同时，给药组每天灌胃给予骨碎补75％乙醇提取物，给药剂 量按生药材计为10g／kg。经大鼠血浆生化指标和骨指标的测定，发现骨质疏松症模型大鼠各