壳聚糖基复合膜预防术后肌腱粘连机理的研究.pdfVIP

常菁等：壳聚糖基复合膜预防术后肌腱粘连机理的研究 壳聚糖基复合膜预防术后肌腱粘连机理的研究。 常 菁1，刘万顺1，韩宝芹1，梁晔1，崔海栋2 摘要： 采用MTT、透射电镜、凝胶电泳、流式细胞 2 实 验 仪、生长因子测定等方法研究壳聚糖基共混糖溶液 (CTSb solution)对L929成纤维细胞生长的影响，从2．1实验材料和试剂 CTSb壳聚糖基复合膜组成成分对成纤维细胞生长的 影响的角度探讨复合膜预防肌腱粘连的机理。结果表 ma公司)；胎牛血清(FBS，HyClone公司)lMTT(Sig- 明，不同浓度壳聚糖基共混糖溶液培养成纤维细胞一 ma公司)；正常熔点和低熔点琼脂糖(GibeoBRL)， 定时问后，MTT、凝胶电泳、细胞周期等指标测定结果 200bpDNA分子量标准(Takara公司)。 均表明共混糖溶液对成纤维细胞生长有明显抑制作 无水乙醇、异丙醇、葡萄糖、醋酸钾、二甲基亚砜及 用；细胞凋亡现象明显；细胞周期发生中断，细胞被阻 其它试剂均为国产试剂分析纯。 滞于GO—G1期；对TGF—B1和aFGF生长因子的分泌 2．2主要仪器 有抑制作用。该研究结果提示复合膜可通过抑制成纤 FACE 维细胞生长来预防肌腱粘连的发生。 关键词： 壳聚糖；预防粘连；机理；成纤维细胞 中图分类号：R318．08 文献标识码：A 司)；MultiskanMK3酶标仪(上海雷勃分板仪器有限 公司)；凝胶图像分析系统(Leca公司产品)。 1 引 言 2．3 实验方法 关于肌腱的愈合机制，主要有两种观点：一是内源 2．3．1不同浓度共混糖溶液的配制 性学说，Garner等应用体外腱段培养技术和同位素示 基础培养基为DMEM，使用时加胎牛血清及双抗 踪的方法研究，证明肌腱在没有外来细胞的情况下，具 液。壳聚糖基共混糖溶液用于本实验时用上述细胞培 有主动合成胶原和细胞增生的能力；另一种是外源性 养液溶解，0．22弘m微孔滤膜过滤除菌，并稀释至相应 学说，以Potenza为代表的认为肌腱愈合是腱鞘与周 浓度(分别为10、50、100、500、1000pg／mL)。 围组织的成纤维细胞增生及毛细管伸人来连接断端。 2．3．2MTT法测定共混糖溶液对成纤维细胞生长的 促进内源性愈合的发生，减少外源性愈合的参与，是当 影响 前大多数研究者解决肌腱粘连问题和提高肌腱愈合质 取对数生长的L929成纤维细胞，接种于96孔细 量所努力的方向。外源性愈合过程中，成纤维细胞是 胞培养板，预培养24h后，吸弃原培养液，换成含不同 瘢痕形成的效应细胞，成纤维细胞胶原合成增加、降解 浓度的共混糖溶液培养液，设立正常DMEM对照组 减少会导致瘢痕中胶原过度积聚，组织学上以纤维细 和无细胞的空白组，各浓度梯度组设立6个平行样。 胞的明显增加和细胞外基质的过度聚集为特征。 壳聚糖是N一乙酰基一D氨基葡萄糖通过}1，4一糖 2．3．3DNA凝胶电泳分析共混糖溶液对成纤维细胞 苷键缩合而成的直链状氨基多糖，是甲壳素脱乙酰后 生长的影响 的产物[1吨]，具有止血、生物屏障、抑菌等作用[3{]。本