枯草芽孢杆菌生物饲料发酵参数优化.docVIP

产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料发酵参数的优化 摘 要 研究旨在优化产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料的发酵参数，试验采用 4 因子 5 水平正交设计和 二因子有重复观察值的设计方法进行，通过测定发酵底物中的植酸酶活性，确定生物饲料发酵条件参数和发 酵底料组成及接种比例。研究结果表明，产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料优化发酵条件参数为温度 37 ℃， 时间周期 72 h，底物初水分 30 %，初始 pH 7. 0; 底料组成和接种量的优化结果: 底料组成为棉粕 90 %和玉 米 10 %; 接种量为 7. 0 mL/100 g。 关键词 枯草芽孢杆菌 发酵饲料 发酵参数 棉粕 中图分类号: S 816. 7 文献标志码: A 文章编号: 1002 －2813 ( 2013) 01 －0027 －05 棉籽饼粕饲料中含有植酸抗营养因子，植酸的 存在会对棉籽饼粕作为饲料的生物学效价产生一定 的影响力。植酸会对动物在自身所必需的矿物质吸 收利用上产生一系列的阻碍作用，如: 引发动物厌 食、消瘦和生长缓慢等病症; 其次棉籽中的植酸减 少了有效磷的利用率; 再次植酸还会影响动物对蛋 白质的消化利用。饲料中添加植酸酶对提高畜禽业 生产效益及降低植酸磷对环境的污染有重要意义。 研究以产植酸酶枯草芽孢杆菌为菌种，以棉粕、玉 米和麸皮为发酵底料，通过正交试验设计法，对枯 草芽孢杆菌发酵饲料的发酵温度、时间、底物初始 水分和初始 pH 等 4 个参数进行优化; 以棉粕和玉 米为发酵底物，通过二因子有重复观察值的设计方 法，对发酵底料组成和接种量进行优化，最终确定 枯草芽孢杆菌发酵饲料发酵工艺参数，为生产优质 生物发酵饲料奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验样品及处理 棉粕、玉米粉和麸皮: 均由新疆石河子天康饲 料有限公司提供，粉碎，过 60 目筛。 产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料添加底物 100 g， 底物中棉粕∶玉米粉∶麸皮为 7∶2∶1。 菌株: 产植酸酶枯草芽孢杆菌 Z3，由新疆石河 子大学动物营养实验室选育。 营养琼脂培养基 ( 涂板用) : 0. 056 MPa 条件 下，121 ℃灭菌 15 min。 植酸酶液体培养基 ( WBE) : 0. 056 MPa 条件 下，121 ℃灭菌 15 min。 1.2 种子液培养 将枯草芽孢杆菌Z3 接入营养琼脂培养基，37 ℃培 养 24 h，挑取 1 环菌苔接入 20 mL ( 50 mL 三角瓶) 植酸酶液体培养基，37 ℃，200 r/min 摇动培养15 h ( 一级菌种) ，取 1mL 一级菌种接入 50 mL ( 150 mL 三角瓶) WBE 培养基，37 ℃，200 r/min 摇动培养 15 h ( 二级菌种) 。 1. 3 枯草芽孢杆菌生物饲料发酵条件参数的优化 试验采用 4 因子 5 水平正交设计试验法优化发 酵条件参数，水平设置见表 1。根据 DpSV6. 05 统 计软件中的正交设计法得到 4 因子 5 水平正交设计 方案，见表 3，利用该表来安排试验处理，每处理 3 个重复，共计 75 个样本。发酵底物 100 g 放入 500 mL 三角瓶中混合均匀，然后按表 3 加入不同体 积的蒸馏水调湿，于 0. 056 MPa，121 ℃ 条件下蒸饲料添加剂 28 饲料研究 FEED RESEARCH NO． 01，2013 气灭菌15 min，冷却后接入1 mL 的二级种子液搅拌 均匀，三角瓶 4 层纱布封口，按表 3 所设置的因子 培养。发酵结束后，将发酵产物放入烘箱中，45 ℃ 烘干 48 h，冷却后粉碎，过 60 目筛，装入样品袋， 保存于 4 ℃冰箱，待测。 表 1 枯草芽孢杆菌固体发酵条件参数 因子 水平 1 2 3 4 5 温度/℃ 29 33 37 41 45 时间周期/h 12 24 48 72 96 底物初水分/% 30 40 50 60 70 初始 pH 6. 0 6. 5 7. 0 7. 5 8. 0 1.4 底料组成和接种量的优化 试验是在产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料发酵 条件参数优化的基础上进行的，即在确定了最优的 生物饲料发酵条件参数后进行。试验采用二因子有 重复观察值的设置 2 因子 5 水平共 25 个处理组合， 见表 2。发酵底物的处理方法与枯草芽孢杆菌生物 饲料发酵条件参数的优化试验相同。培养结束后， 测定发酵产物鲜样中植酸酶的活性及枯草芽孢杆菌 的数量。 表 2 棉粕与玉米比例和接种量的因子与水平 因子 水平 1 2 3 4 5 接种量/ ( mL·100 g － 1 ) 1 3 5 7 9 底物比例 ( 棉粕 ∶ 玉米 ) 100∶0 90∶10 80∶20 70∶30 60∶40 1. 5 测定指标 植酸酶活性的测定，测定方法参照 GB/T