玉米叶绿体同工酶的研究.pdfVIP

遗 传 学 报， 10(1):43--50,1983 Actu Genetica 5inica 玉米叶绿体同工酶的研究 曾孟潜 杨太兴 （中国科学院遗传研究所，北京） 本文报告玉米叶绿体两种同工酶图式的研究结果;(1)过氧化物酶同工酶显示 7-12条酶 带，细胞色素氧化酶有7-11条酶带；(2）叶绿体与上清液中，同一品系两种同工酶图式一致； 3（）杂种F。中第4和第，条互补酶带表现稳定。可能与光合性能的改善有关。 有些学者研究过豆类、臭松、玉米、小麦等植物细胞内线粒体、细胞壁、溶酶体及核糖 体的过氧化物酶及其同工酶等的活性3-‘5,7-97，而植物叶绿体同工酶的研究工作，国内外均 未见有专论。近3年来我们以玉米为材料，深人分析叶绿体同工酶图式，并确定它与杂种 优势表现的关系。现报告如下。 材 料 与 方 法 材料 1979-1981年间，采用两个在叶片组织提取液中有过氧化物酶同工酶互补 酶带的玉米杂种F，及其亲本系，即黄早4X罗系3及黄早4、罗系3,:48788XG4040-- 5550及748788,(74040-5550为试验材料，3年度均分两期播于本所试验农场。分别于 八叶期、孕穗期 （13-15片叶）、抽丝期、籽粒形成期取样。前二生育期取第3（自上而下 数）全展叶片，每品系取斗一5株；后二生育期取顶叶叶片，34株混合制样。均设两次重 复。 制样方法 从取叶片到制样、电泳整个过程均在0-4℃下进行。叶片经蒸馏水冲 洗、滤纸吸干去主脉后，称取5-7克样品剪碎，在研赫中研磨成匀浆，加人4-，倍样品重 的缓冲液，用8层纱布过滤，滤液随即进行离心分离叶绿体。缓冲液配方及分离叶绿休过 程如下： 缓冲液I:KCl0.01.11,蔗糖0.3M,磷酸缓冲液。.05M,pH7.2c 缓冲液 IW:tilgCl,1mM,MnC1z1mM,NazEDTA 1.5mM,KHCO30.05M, Na4P,075mM，CH3000Na0.5mM，Na2HPO40.5mM，FeCl30.1mM，L-AscorbicAcid- 111-1111，L(+)-Glutamate1mM, BSA0.01%，Ficoll2.5 ，d-Sorbitol0.35M,Tris-HCI 0.05 ，pH7.bo 离心获得的叶绿体，经光学显微镜检查，未见有别的细胞组分掺人，完整度较好，大部 分叶绿体具有完整的叶绿体膜。为比较分析起见，同时收集经12,000Xg离心15分钟的 上清液，然后将叶绿体经干冰冻融3次，使之充分裂解，并于 Edward 瑞（典）冰冻干燥 本文于 1982年3月9日收到。 1）在文献[10］的基础上略加改良。Sorbitol用d-sorbitol浓度由0.25M改为0.35M;EDIA改用NazFDTA Ascorbicncid用 T.--Ascorbicacid.,Glutarnate用 L,+,-(,iutamate,浓度不变。 44 遗 传 学 报 10卷 叶片匀浆过滤液 I700Xg,’‘ 细胞核 上清液 弃（去） 毒”，。。。xg,0‘ 工 ｛ 叶绿体 上清液 (ct) 12,000Xg,15} 用缓冲液洗二次 线粒体 上清液 （弃去）