以重组腺相关病毒为基础的肝脏疾病的基因治疗研究.pdfVIP

第二届”CSC0一南方”肿瘤生物治疗与分子靶向治疗论坛 较多。在培养基中加了游离叶酸后，Hela细胞对荧光颗粒的摄取量明显减少。结果表明：通过叶酸受体介导可以显著提高 Hela细胞对叶酸壳聚糖微球的摄取能力。培养基中加入游离叶酸后，由于游离叶酸优先结合了Hela细胞表面的部分叶酸受 体，从而竞争阻断了荧光颗粒进入肿瘤细胞的通路。 3．5 FA．Chi／PTXNP、Ch慨NP及PTX对Hela细胞增殖活性的影响 NI、Chi／PTX NP仍分 检测得到细胞的抑制率。由图5可知，PTX浓度高达30ttg／ml时，10％的细胞存活，而FA-CIu／PTX NT、Chi／vrx NP却有85％ 别有35％及65％的细胞存活；FIX浓度低达1心／ml时，PTX虽有70％细胞存活，但FA-Chi／PTX 及90％细胞存活。这表明结合壳聚糖纳米微球载体降低了抗肿瘤药物PTX的细胞毒性。靶向载PTX微球对细胞的抑制作用 高于普通载PTX微球，可能是因为FA-Chi／PTXNP表面修饰的叶酸与肿瘤细胞表面的叶酸受体结合，介导颗粒进入细胞， 从而更有效地抑制细胞生长。 4讨论 壳聚糖作为一种离子聚合物，氨基是其主要功能基因。本研究利用壳聚糖氨基与叶酸活性酯反应形成稳定的酰胺键， 制备叶酸壳聚糖偶联物。再利用壳聚糖氨基在偏酸溶液中质子化带正电荷，与阴离子11)P吸附交联形成壳聚糖微球。若先 制备壳聚糖微球，再将叶酸修饰至微球表面，反应难以进行．可能是因为形成微球后的壳聚糖分子上的氨基基团大部分被 TPP的磷酸基团所占据，同时由于空间位阻的可能，没有足够的氨基与叶酸活性酯充分的反应。故先制各叶酸壳聚糖偶联物， 再制备微球。壳聚糖纳米微粒的制各有物理方法和化学方法。物理主法存在诸多缺点现以很少采用。本实验采取的离子凝胶 法，实验条件温和，不引入有机溶剂，简单易行，结果显示制备的纳米粒外观形态较好，粒径分布均匀。另外将药物与壳聚 糖混合后一起制成微球可以将药物更好地包封于微球核内，从而达到较高的包封率。临床上希望载药量越高越好，但在实际 制剂工艺中，受到各种条件限制，很难达到理想化。FIX是难溶药物，加上纳米粒粒径小，真正包裹于内部药物量很小。 饰叶酸的FA-Chi／PTXNT，由于能特异性识别肿瘤细胞表面叶酸受体，通过叶酸受体内化途径，靶向性地抑制细胞生长，故 FA-Chi／FFX 可能是由于FIX分子可以比较容易地穿透细胞膜，较快速地进入细胞，相同条件下，纳米粒进入细胞的速度就低于PTX， 因而在体外共同培养相同时间的条件下，FIX的抑制率高于经壳聚糖纳米粒修饰的m【。在体内给药时，情况与体外细胞培 retention effect)效应【】o】，纳米粒能够以高于游离药物的浓度浓集于肿瘤组织。我 养不同，由于肿瘤的EPR(ehancedpermeability 们将尝试下一步做体内实验。 以重组腺相关病毒为基础的肝脏疾病的基因治疗研究 ERockefeller 尤长尘t．3t张大志1。2．石敏“3。罗蒙城3用军1‘，PaulL．Hezmonatl．KalnnL．Mehtal，刺勇1(1．GeneCenter；Wmthrop Mahal，Jay Therapy ofInternal of Medical Cancer Medicine。UAMS ofAlkansasfor Institute；Department Hospital．CollegeMedicine。University 庆医科大学附属g