新型基因转运功能表面活性剂的研究.pdfVIP

第五届全国精细化T清洁生产1二艺与技术经济发展研讨会论文集 95 新型基因转运功能表面活性剂的研究 赵轶男，崔韶晖，张树彪 (大连民族学院生物化学工程国家民委一教育部重点实验室，辽宁大连116600) 摘 要：阳离子表面活性剂作为一种重要的非病毒基因载体，还存在转染效率低和具有一定的细胞毒性等缺 点。采用二氯甲烷作为反应溶剂体系，以2．(7．偶氮苯并三氮唑)．N，N，N7，N’．四甲基脲六氟磷酸酯(HATU) 为缩合试剂。以甘氨酸为阳离子头部，十二碳的双长碳链为疏水尾部，设计合成了一类基因转运功能表面活性 剂——氨基酸头部阳离子类脂。经红外光谱、质谱表征，结构得到验证。建立氨基酸头部阳离子类脂的合成方 法和分析测试手段，为介导基因转运提供安全有效的载体，为探索基因治疗提供新方法和新技术。 关键词：基因转运；表面活性荆；氨基酸；阳离子类脂 中图分类号：Q343．1；Q78 文献标志码：A 表面活性剂是药品中重要的添加剂，很早就被 可大为降低(氨基酸型表面活性剂的毒性较同类阳离 应用到医药中。近年来应用更加广泛。在医药中表面 子表面活性剂低得多)。类脂结构中的多氨基结构能 活性剂常被用作药物载体、药物的分散乳化剂、增溶 提高脂质体的转染效率(多氨基化合物的高转染率已 剂、润湿剂、稳定剂、释放剂、吸收促进剂，还有一些 被许多研究证明H。1)。因此，多肽阳离子脂质体作为 可以直接用作治疗药物和杀菌消毒剂l”。阳离子脂质 非病毒基因载体中重要的一种，凶操作简便，转染的 体是基因治疗中最广泛使用的一种表面活性剂，具有 安全性和高效性而得到研究人员的广泛关注。 类细胞结构和生物膜的特性，在体内可降解，可以保 护其运载基因片段的生物活性12l，但还存在转染效率 1 实验内容 低、靶向性及稳定性差等缺点。为了解决这些问题就 1．1仪器与试剂 必须设计合成出新的阳离子类脂分子，改进阳离子脂 仪器：旋转蒸发仪，上海亚荣生仪器厂；DHG一 质体及脂复合物的制备方法，增强阳离子脂质体载体 9070A利电热真空干燥箱，上海精宏实验设备有限公 系统的靶向性。根据仿生学原理，蛋白质和多肽类物 质往往具有特定的生物信号，能够显著改善细胞在其 液相质谱联用仪，日本岛津公司。 表面的粘附等行为J。然而以氨基酸或肽制备阳离子 试剂：Boc—Gly—OH(AR)，上海青尔生化有限公 脂质体，能延长其在体内的半衰期和增强靶向性。因 司；2一(7一偶氮苯并i氮唑)一N，N，N’，N’一四甲基脲六 为多肽几乎无毒，氨基的毒性通过阴离子基团的引入 氟磷酸酯(HATU，分析纯)，上海共价化学科技有限 基金项目：围家自然科学基金资助项目． 作者简介：赵轶男，女，工程师，硕十，主要从事非病毒基因载体方面的研究j：作； 张树彪．男，教授．博士，主要从事非病毒基因载体方面的研究上作。通讯作者。 赵轶男等：新型基岗转运功能表面活性剂的研究 公司；羰基二咪唑、氯仿、二氯甲烷、甲苯、正十二醇 轭羧基的伸缩振动吸收峰，1264．14era一处的吸收峰 等均为市售国产分析纯。 为N—H的弯曲振动吸收。 1．2阳离子类脂合成 1．2．1 中间体CDl2的制备 将羰基二咪唑(40mm01)和正十二醇(40mm01) 分别用50raL甲苯溶解，在40℃下，两溶液滴加混合， 反应2h。然后再准确称量二乙烯三胺(20ret001)用 图1 阳离子类脂中间体CDl2的红外光谱图 Infrared ofcationicintermediateCDl2 50mL甲苯溶解，滴加到上述反应液中，继续反应2h。 Fig．1 spectrum lipid 反应完毕，过滤反应液得澄清液体，旋转蒸