新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立.pdfVIP

医学研究生学报 2014年2月 第27卷 第2期 JMedPostgra，Vo1．27，No．2，February，2014 ·129 · 论 著 (基础研究) 新生 鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成 纤维细胞分化模型的建立 孙 月，徐 洪，徐丁洁，魏 中秋，于婉莹，邓海静，薛新新，杜世璞，杨 方 摘【要】 目的 肌成纤维细胞(fibroblasts，FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞，以特异表达0一平【滑肌肌动蛋白 (0一【smoothmuscleactin，o．【SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋 白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺 点，并报道体外肌FB分化模型的建立。 方法 分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺 FB，倒置相差显微 镜观察原代培养，MTF法检测细胞增殖，免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源，采用转化生长因子 p·1(transforminggrowthfactor- 131，TGF一3／1)诱导FB向肌FB分化。 结果 采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB，2种方法 无论在形态 、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异，但胰蛋 白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多 的细胞，且2种方法获得的FB在4代之 内均不表达 d—SMA，需经TGF一3／1诱导分化为肌 FB。随TGF一3／1诱导时间的延长 ， Of．．SMA和 I型胶原蛋白表达上调。 结论 胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB，4代以内的乳鼠FB 适合建立肌 FB分化模型。 [关键词】 成纤维细胞；原代培养；肌成纤维细胞 [中图分类号】 R813．11 【文献标志码】 A 【文章编号】 1008—8199(2014)02-0129-04 Trypsindigestionversustissueadherenceinprimarycultureoflungfibroblastsfrom newbornratsand establishmentofamyofibroblastdifferentiationmodelinvitro SUNYue，XUHong，XUDing．jie，WEIZhong—Qiu，YUWan—ying，DENGHai-jing，XUEXin—xin， DU Shi．pu ，YANG Fang (1．MedicalResearchCenter，2．CollegeofTranditionalChineseMedicine，3．DepartmentofPathology，HebeiUnited University，Tangshan063000，Hebei，China) [Abstract] objective Myofibroblasts，characterizedbyspecificexpressionsof ·smoothmuscleactin(0一S【MA)andextra— cellularmatrix(ECM)proteins，arecriticalcomponentsoforganfibrosis．Theaimofthisstudyistocomparetrypsindigestionwithtis- sueadherenceintheprimary cultureoflungfibroblastsisolatedfrom newbornratsandestablishamyofibroblastdifferentiationmodelin vitro． M ethods Weprimarilycuhuredlungfibroblastsrfom newbornratsbytrypsindigestionandtissueadherencerespectively．For invitrostudies，weobservedcellmorphologyundertheinve~edphasecontrastmicroscopeanddeterminedcellproliferationan