噬菌体展示技术的研究进展(1).pdfVIP

第30卷第2期 吉 林 医 药 学 院 学 报 V01．30No．2 of 2009年04月JournalJilinMedical CollegeApr．2009 —97一 文章编号：1673-2995(2009)02-0097-03 ·综述· 噬菌体展示技术的研究进展 Research on progressphagedisplaytechnology 孙美艳，张磊，李艳(吉林医药学院检验系，吉林吉林132013) 摘要：噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而表达子噬菌体颗粒表面，被展示的 外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性。最近有实验表明噬菌体表面展示的外源多肽模拟了天然抗 原的空间结构，利用筛选肽库的方法确定抗原的线性和构象型表位是可行的。这对于发现与疾病相关的抗原 表位具有一定的普遍意义，有可能在未知的情况下进行疫苗及诊断分子的设计。 关键词：噬茵体展示技术；原理；应用 中图分类号：Q782 文献标识码：A 1982年Dulbecco首次提出在噬菌体或其他病毒细菌，因此只能特异性感染雄性大肠杆菌。首先，噬 表面展示外源抗原决定簇或多肽的概念。1985年美菌体结合到雄性细菌的F菌毛末端，使菌毛回缩，将 P．Sminl将Rl核酸内切酶基噬菌体的单链带入细菌内，单链DNA转化成双链复 国Missouri大学George 因克隆到丝状噬菌体(Filamentous 制型DNA，作为模板产生子代病毒蛋白和单链DNA。 bacteriophage，fd) 的外壳蛋白基因3中，并成功地得到了在外壳蛋白中 在此过程中，病毒外壳蛋白锚定在细胞膜，当DNA穿 融合表达了酶分子的噬菌体粒子…。该噬菌体能够 过细胞膜时，包装DNA，通过细菌分泌作用释放出新 被EcoRI核酸内切酶抗体有效中和，说明展示在噬菌的病毒粒子。丝状噬菌体是一种长度约为l岬，直 体外壳表面的酶分子与天然酶分子有着相同或极为 径为6nm的可变棒状体。野生型fd噬菌体基因组 相近的构象和活性。这一实验的成功诞生了噬菌体 含有6408个碱基对，共10个基因，编码10个蛋白 展示技术。该技术将展示肽的表型与基因型通过丝 质。作为一种基因载体，它的长度可以随着插入的 状噬菌体直接地联系起来旧J。 DNA片段的大小而发生变化。正是由于这个特点， 噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌 才使这类噬菌体早已成为进行DNA测序和寡核苷酸 体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面，被展示的 直接诱变的载体。噬菌体基因组的复制型是双链 外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性。 DNA，所以外源片段克隆进入载体的操作比较容易。 展示的多肽可以是短肽和大分子蛋白质，例如，免疫 球蛋白、蛋白酶和抗原表位等。 2噬菌体展示技术的原理 1丝状噬茵体的结构和生物学特性 丝状噬菌体展示技术主要与2种外壳蛋白有关， 700个亚单 一种是主要外壳蛋白P8蛋白，大约有2 丝状噬菌体主要包括大肠杆菌丝状噬菌体M13、 位；另一种是次要外壳蛋白P3蛋白，在噬菌体表面只 fd、f1等，属于丝状噬菌体科、丝状噬菌体属，它们的 有几个。这2种蛋白均可作为载体来展示外源多肽 亲缘关系十分密切，大小与形状相近，都包括一个单 或蛋白，但各有其优缺点。 2．1 P3展示系统 链环状DNA，已发现其基因组的全序列有98％以上 的