微生物的显微镜直接计数法和大小的测定.pptVIP

实 验 五 实验四 微生物的显微镜直接计数法和大小的测定 实验目的 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。 实验步骤 测定酵母菌细胞的大小测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。 目镜测微尺的校正：在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以可得 目尺每格长度(μm)=（台尺格数×10）/目尺格数 菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 酵母菌显微直接计数 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半 实验结果 目镜测微尺标定结果：40×镜下 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 菌号 酵母的直径大小测定结果 ? 目镜测微尺格数 实际直径/μm 1 ? ? ? 2 ? ? ? 3 ? ? ? 4 ? ? ? 5 ? ? ? 均值 ? ? ? 将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。 ? 各中格中菌数 T D 二室平均值 个/ml 1 2 3 4 5 第一室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第二室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 问题与讨论 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？ 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？