温度对鲤鱼肝脏细胞超微结构的影响.pdfVIP

温度对鲤鱼肝脏细胞超微结构的影响1 刘晓晖，盛连喜，王云彪，于文广，徐镜波* 东北师范大学环境科学与工程系，长春（130024 ） E-mail ：xujb515@ 摘 要：实验室模拟生态条件下，研究不同温度暴露条件下鲤鱼肝细胞超微结构的变化。不 同温度结果表明在25℃～29 ℃的时候，肝细胞内线粒体和内质网出现增生状态。在31.5±1℃ 的时候，线粒体数量减少，而滑面内质网大量出现。在 35±1℃左右的时候，肝细胞内的细 胞质中糖原颗粒的分布呈现出斑块化状态，线粒体数量开始减少，结构破碎化严重，同样内 质网结构也呈现出破碎化的状态，但是，内质网以糙面内质网为主。 关键词：温度，鲤鱼，肝脏，超微结构，线粒体，内质网 1 引言 [1] 大型火电厂在冷却水的排放过程中，会对环境产生污染，例如对水体中生物产生影响 ， 这是热污染的一个方面。关于热污染对水生生物影响的报道，参考国内外文献，主要针对的 是水生生物的宏观研究上[7,8] ，在微观方面，也有相关报道，例如热污染与应急蛋白表达[2] 等。但是在形态学上关于热污染水体对水生生物的影响报道较少。 冷却水在利用过程中可以作为养殖水[3]源，生活在其中的鱼类出现体形瘦小的趋势，这 与生物体的能量代谢器官肝脏有着密切的关系[4] 。线粒体等细胞器官结构是肝细胞内完成生 物化学反应的重要化学物质酶的附着位点[5] ，因此在微观角度研究温度对鱼体肝细胞超微结 构的影响具有重要的意义。 2 材料与方法 2.1 实验材料 2.1.1 实验生物 健康鲤鱼（Cyprinus carpio ），体重600±50g。鲤鱼是我国养殖最广泛的淡水鱼种类之一, 生长快,产量高,是一种重要的经济鱼类，同时，也是国内外标准实验材料之一。 2.1.2 实验药品 NaH2PO4 、Na2HPO4 、25%C5H8O2 、OsO4、C2H5OH、C3H6O、包埋剂（Epon812 、 DDSA、DMP—30 ）、蒸馏水。 2.1.3 实验仪器 玻璃鱼缸、电子天平、分析天平、细口瓶、量筒、精密试纸、玻璃棒、广口瓶、铜网、恒 温加热箱、牙签、聚合器、Hitachti——600 型透射电子显微镜。 2.2 实验方法 2.2.1 热影响试验 实验室生态条件下，设置鲤鱼驯养条件，按照安全受热方程式： 1本课题得到国家自然科学基金（项目号），高等学校博士学科点专项科研基金（项目号： 20040200002 ），国家重点基础研究发展计划（973 计划，子课题编号：2004CB418505 ）的资助。 - 1 - [67] y= （26.26+0.4x ）-2 求出最大短期暴露高温 。其中y ：短期半致死温度，本实验条件 下为30.26℃；x ：驯化温度，本实验室条件下x 为 15±1℃。驯养温度，以0.3℃/min 开始 升温，根据生理反应取出鲤鱼肝脏，进行实验观察。 2.2.2 透射电子显微镜试验 3 1、取材 取出染毒组和对照组的鲤鱼肝脏组织，用双面刀片切成1mm 左右的小块。 2 、前固定 将取下的鲤鱼肝脏组织迅速放入装有2.5%戊二醛固定液的瓶中固定。 3、漂洗 经戊二醛固定后的组织块用缓冲液漂洗1~8 小时，将组织表面的戊二醛洗净， 在此期间更换2~3 次缓冲液。 4 、后固定 将洗好的组织块放入 1%饿酸固定液中固定2 小时。 5、漂洗 从饿酸固定液中取出组织块用蒸馏水清洗五分钟，洗净样品表面的饿酸。 6、脱水