分子生物学技术在食品微生物检测中的应用.pdfVIP

2011年 3月 广西轻工业 第 3期 (总第 148期) GUANGXIJOURNALOFLIGHTINDUSTRY 食 品与生物 分子生物学技术在食品微生物检测中的应用 肖剑 (广州市食品工业卫生检测所，广东 广州 510410) 【摘 要】 介绍了多重PCR技术、核酸探针技术、基因芯片技术、DNA指纹图谱等分子生物学技术应用原理、特点，着重 讨论了它们在食品微生物群落分析、分型鉴定中的应用。 【关键词】分子生物学；食品微生物检测；PCR 【中图分类号】TS207 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—2673(2011)03—10—03 近年来，人们致力于研究病原性微生物的检测和控制，对 可直接用来监测包装中蔬菜沙拉的微生物种类凹。 于传统检测方法不断改进和创新，微生物专用酶快速检测技 术、PetrifilmTM测试片应用、自动化微生物分析仪的发展，尤 3基因芯片技术 其是全自动微生物检测系统的应用，提高了检测的速度、准确 基因芯片技术是近年来分子生物学及医学诊断技术的重 性和敏感性。然而，某些微生物的检测仍然相当繁琐，敏感性较 要进展，在食品中致病菌分析检测中，选择细菌的共有基因作 低，而且在整个微生物物种中，能够培养的微生物是很少的，这 为靶基因，用一对通用引物进行扩增，再利用芯片上的探针检 类难培养和不能培养的病原微生物不能依靠传统培养法检测。 测不同细菌在该共有基因上的独特碱基，从而区分不同的细 随着食品微生物基因组学的研究迅速发展，越来越多的病源微 菌，由于此法是由很多种核酸探针所组成的，可以通过添加或 生物基因信息被获得，另外，随着体外重组 DNA技术 、微生物 调整合适的探针来逐步扩大基因芯片的检测范围和提高芯片 基因突变及诱变技术、核酸技术及遗传学发展，对微生物分子 的准确性。近年来许多研究者采用基因芯片技术分析检测食品 水平上的研究加快了利用分子生物学技术对微生物检测的进 中常见微生物。BernardBerger等人对 12株嗜酸乳杆菌群应 展，本文对近年来分子生物学技术在食品微生物检测中的应用 用基因芯片技术以及其他分子标记技术进行了分析研究 ； 展开论述。 BoruckiMonica．K等人准确鉴定了各种近缘单核李斯特菌分 离物5[1。 1多重 PCR体系的建立和应用 PCR技术已经运用于食品中单一致病菌的检测，通过单一 4DNA指纹图谱技术 PCR技术可进行定性或定量分析，并得到一定程度的推广，但 4．1以电泳为主导技术的DNA图谱技术 食品中往往含有多种致病菌，在定量PCR发展的基础上，多重 4．1．1变性梯度凝胶 电泳标记技术(DGGE) PCR体系通过优化PCR条件，对两种或多种致病菌进行同时 DGGE技术检测核酸序列是通过不同序列的DNA片段在 检测的方法，目前已在多种病原微生物的检测中得到了初步的 各 自相应的变性剂浓度下变性，因解链行为不同，使不同序列 应用，是食源性致病菌快速检测技术的重要开发方向。 的DNA片段滞留于凝胶的不同位置，经过染色后可以在凝胶 蔡亦红等建立了肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌、福氏志 上呈现为分散的条带。DGGE技术被广泛应用于分析食品中微 贺菌三种致病菌的多重PCR技术，通过对3种食源性致病菌 生物分离和鉴定及其相关产品的微生物群落种群数量动态变 的特异性基因片段的选择，建立多重PCR体系并优化tI【；Kim 化，2004年J．Theunissen和T_J．Britz等人对南非益生茵食品 等运用多重PCR技术完成对大肠杆菌O157：H7、沙门氏菌、金 进行了抽样检查，他们用DGGE法确认了食