乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定.pdfVIP

· 418 · 主 塞 塑堕 塑重堂垄查 生 旦笙垫鲞笙 塑 hi! 』xp inViral，Decembe2009，V。I．23，No．6 ． 论 著 乙脑病毒 SA14—14—2株复制子载体的 构建及鉴定 韦艳 ，李川 ，陆鹏，于建石 ，李建东，刘琴芝，张全福 ，李德新 【摘要】 目的 构建乙脑病毒SA14—14—2株复制子载体，为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型 疫苗奠定基础。方法 (1)构建 了两个 乙脑病毒复制子 ：一个为完全缺失 PrM／E基 因(命名为 Fuu AprM／EReplieon)；一个保留E基 因c端 213bp(命名为PaaialAprM／EReplicon)，并代之以多克隆位点。 (2)将 复制子 RNA转染 BHK．21细胞 ，于24、48、72、96h采用 Rea1．timePCR验证复制子的 自主复制 能 力。(3)于复制子多克隆位点处插入 YFP报告基因，并将含报告基 因的复制子 RNA转染 BHK．21细 胞 ，采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证 YFP的表达。结果 (1)两个复制子 RNA转染 BHK． 21细胞后 ，RNA有随时间增加而不断增多的趋势 。(2)含报告基 因的复制子 RNA转染 BHK一21细胞 后 ，荧光信号持续增强，表达 YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论 构建的乙脑病毒 SA14—14．2株复 制子载体FullAprM／EReplieon及 PartialAprM／EReplicon具有 自主复制能力及对外源蛋白的表达能力 。 【主题词l 脑炎病毒 ，日本； 复制子； 杂合子检测 IdentificationandconstructionofrepHconvectorsofJapaneseencephalitsvirus(strainSA14-142·) WEI Yan，LIChuan，LU ，YUJian-shi，LIJian-dong， UQin-zhi，ZHANGQ∞ ，LIDe-xin．StateKey LaboratoryforInfectiousDiseasePreventoinandControl，InstituteforViralDiseaseControland PreventoinChinese CenterforDsieaseControlandPreventoin，Beijing100052，China Correspondingauthor：LIDe-xin，Emaif：fidx@chinacdc．ca 【Abstract】 Objective InordertolaytllegroundworkforstudyingthenovelvaccineIdentified．Methods (1)Tworepliconswereconstructed．One’SprM／Egenewasdeletedcompletely(FuUAprME／Replicon)，the other’sprM／E genewasdeletedpartially (213bpofC terminal ofE genewasreserved；PartialAprM／E Replicon)，andthedeletedpartswasreplacedastheMCS．(2)RepliconsRNAwerewhichwillusetIleJEVasthe vector，replieon vectorsofJEV wasconstructedandtransofeted intoBHK一21celi．After24。48，72，96h， mehtodofrea1．timeFCRwasusedtoidentifyReplicons’replicationability．(3)YFPgenewasinsertedintothe MCSofhtosetworeplicons．nleirRNA wastransfected intoBHK一21cel1．Expression ofYFPwastestedbythe fluorescencemicroscopyandflow cytometer．Results (1)Aftertl1etworepliconsRNAweretransfeetedinto BHK．21cell，asti