酿酒酵母中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代谢研究.pdfVIP

广西科学GuangxiSciences2009，16(4)：446~450 酿酒酵母 中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代 谢研究-K ActiveExpressionofXyloseIsomerasefromThermobifida ftuussccaai。n~SaacccchnaaromL~ycesCerevisiaeandtlIIttssI1nnfll1ueennccee onXyloseM etabolism 王青艳 “，杨登峰 ，孙 靓 ，陆 雁 ，黄 日波 一 WANGQing—yan，，YANG Deng—feng ，SUN Liana，LU Yan ，HUANGRi—bo。 (1．广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心 ，广西南宁 530007；2．广西大学，广西南 宁 530003) (1．NationalEngineeringResearchCenterforNon—foodBiorefinery，GuangxiAcademyofSciences， Nanning，Guangxi，530007，China；2．GuangxiUniversity，Nanning，Guangxi，530003，China) 摘要 ：将来 自嗜热放线细菌Thermobifidafusea的木糖异构酶 (xyloseisomerase，XI)基因：cylA，连接于酵母表达 载体pYES2的半乳糖诱导启动子 (PGAI)下 ，得到重组质粒 pYES2一xylA，用其转化酵母菌 INVScl，测定重组 酵母菌株 INVSc卜aylA 的木糖异构酶活性 ，并对重组酵母菌株进行木糖葡萄糖共发酵试验 ，探讨在酿酒酵母 中 建立新 的生产乙醇木糖代射途径。结果木糖异构酶在75C，pH值6．8的酶活力最高，在酿酒酵母 中成功地获得活 性表达 ，并且 SDS—PAGE 电泳有明显的特异性表达产物带 ，单体分子量为43kD。INVSc1．1ylA在木糖葡萄糖共 发酵实验 中消耗木糖和产生乙醇分别 比对照菌提高53．8 和36 ，提高了其生产 乙醇的能力。 关键词：木糖代谢 木糖异构酶 嗜热菌放线菌 酿酒酵母 中图法分类号 ：TQ926 文献标识码 ：A 文章编号 2009)04—044605 Abstract：ThexyloseisomerasegenexylA ofThermobifidaf~scawassuccessfullyclonedinthe yeast expression vector pYES2 tO construct recomninant that consume Xylose to produce ethano1．Thefusedgenewasunderthecontrolofthegalactose—ind—uciblepromoter(PGAI)．The recombinantplasmidwastransformedintotheyeaststainSaccharomycescerevisiaeINVSclbythe lithium acetatemethod．TherecombinantstrainnamedINVScl／pYES2一xylA wasabtained．The recombinantxyloseisomeraseactivity wasdeterm ined bythemodified glucoseoxidaseassay and showedthehighestactivityat75 ( andpH6．8．Production ofrecombinantxyloseisomerasewas seen in theCoomassie stained SDS—PAGE geland themolecularmasswasestimated tO be 43kD．Glucose and xylose CO—fermentation by INVScl／pYES2一．rylA were carried out．the consumptionofxyloseandtheproductionofethanolwere53．8％ a