采用组织块法培养心房颤动患者心房成纤维细胞.pdfVIP

· 506 · 中国心脏起搏与心电生理杂志2009年第23卷第6期 采用组织块法培养心房颤动患者心房成纤维细胞：i： 张建成 程显禄 黄宇坚 许春萱 [摘要] 目的 建立心房颤动 (简称房颤)患者心房肌成纤维细胞培养模型。方法 通过心脏外科手术获得房颤 患者右心耳组织30mg，对经典的大鼠组织块培养法作改进 ，采用组织块放入75％酒精中浸泡 1min，培养基配方和 植块方法改进，第二代传代时采用差速贴壁法除去内皮细胞，培养房颤患者心房肌成纤维细胞。结果 形态学观 察显示 ，心肌成纤维细胞生长较慢，3天左右开始从组织块边缘爬出，l0天呈接合状态，细胞呈梭形，细胞排列较紧 密，有的交叉重叠生长，胞核较大，呈椭圆形 ，通常含 1～3个核 ，胞浆透明，胞体较大，无搏动 ；免疫细胞化学染色可 见，心肌成纤维细胞波形蛋白呈强阳性反应，第八因子呈阴性反应；成功培养的心肌成纤维细胞纯度达95％以上。 结论 采用组织块法可成功培养人心房的心肌成纤维细胞，且简单、易行。 [关键词] 心血管病学；心房颤动；心肌成纤维细胞；细胞培养 中图分类号 R541．7 5 文献标识码 A 文章编号 1007—2659(2009)06—0506～L{ A modelestablishmentforcellcultureofhumanmyocardialfibroblastswithtissuecultureinatrialfibrillationpa- tients．ZHANGJian—cheng，CHENGXian—lu，HUANGYu-jian，XUChun—xuan．MedicineDepartmentofCardiology，Provin— cialClinicalSchoolofFujianMedicalUniversity，FujianProvincialHospital，Fuzhou350004，Fujian，China [Abstract] Objective Toestablishthemodelforcellcultureofhumanmyocardialfibroblastsinatrialfibrillationpa— tients． M ethods humannmyocardialfibroblastswereisolatedandculturedwithaimprovedtechniqueoftissueculture． Tissuewasimmersedinto75％ alcohol1minute，improvedexplantmedium formulationsandplantingways；Thesecond CellSubcultureuseddifierentialadhesionmethodtoremoveendothelia1cells． Results Morphologyofthecellswereob— servedusingtheinvertedmicroscope．Myocardialfibroblastsgrowedslowly，abautthreedaysclimbingfrom theedgeofthe tissueandtendaysshowingfusionstate，closelyarranging，andsomeoverlaping；Itwasspindle—shaped，larger，transparent inthecytoplasm ，anditwasmuch largernucleusthatwasoval—shaped，usuallywith 1or3nucleusand non—spontaneous beat．Identificationofimmun0cytochemicalstainingshowedthatcardiacfibroblastsshowedstronglypositivereactiontovim— entinandnegativetofactorVIII，which showedthepurityofcellsculturedwasmorethanpercent95． Conclusion The modelofcellcultureofhumanmyocardialfibrobl