靶向血管内皮生长因子siRNA对K562细胞凋亡及survivin表达的影响.pdfVIP

皿液学杂志2009年 l2月第30卷第 12—~, ChinJHemato|,December2009,Vo1．30,No．12 · 825 — — — · 论 著 · 靶向血管内皮生长因子 siRNA对 K562细胞凋亡及 survivin表达的影响 李方方 郑改焕 徐酉华 罗庆 【摘要】 目的 应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)siRNA沉默K562细胞中VEGF的 表达．观察其对 K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法 应用成功构建的携带特 异性VEGFsiRNA的重组腺病毒 (AdS—VEGFsiRNA)感染 K562细胞，实验分为3组 ：实验组 (K562／ Ad5一VEGFsiRNA组)、空载体组 (K562／Ad5组)、对照组 (K562组 )。通过 RT—PCR法检测细胞 内 VEGF及survivinmRNA的表达，ELISA法检测细胞培养上清中VEGF蛋 白表达，Westernblot法检测细 胞 survivin蛋白表达 ，流式细胞术检测细胞凋亡 。结果 实验组细胞 VEGF及survivinmRNA表达水平 较对照组均有明显降低(P0．01)，且细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平 [(11214-15)pg／m1]低于 空载体组 [(1290±28)pg／m1]和对照组 [(1303±28)pg／m1](P0．O1)。Westernblot法检测结果显 示，实验组 survivin蛋白表达水平 (0．26-40．11)较对照组 (0．74±0．10)也显著降低(P0．01)。实验 组细胞凋亡率与对照组比较明显增加 (P0．01)。结论 应用RNA干扰沉默K562细胞中VEGF基 因表达后，survivin的表达也随之降低．同时细胞凋亡率相应增加。VEGF可诱导K562细胞中survivin 基因表达．可能是 survivin基因表达的上游调控因子。 【关键词】 RNA干扰；血管内皮生长因子 ；细胞凋亡；K562细胞 EffectofsiRNA targetingVEGF oncellapoptosisand theexpressionofsurvivin in K562cells LI ， ng，ZHENGGai—huan，XUYou—hua，LUOQing．DepartmentofHematolog)， eChildren’sHospi— tal，ChongqingMedic1(1Universit)，Cbongqing 400014，ChinⅡ Correspondingatzth~r：XU You—hu1(，Entail：etzhl@ 163．corn A【bstract】 Objcetive Tostudytheeffectofadenovirusvector—mediatedsiRNAtargetingvascular endothelialgrowthfaetor(VEGF)onapoptosisandtheexpressionofsurvivininK562cells．Methods K562cellswere infected with recombinantadenovirusAc15 VEGFsifor72 hoursasexperimentalgroup (K562／Ad5一VEGFsi)，andemptyvectorrgoup(K562／Ad5)andblankcontrolgroup (K562)ascontrols． VEGFmRNA andsurvivinmRNAexpressionweredeterminedbyRT—PCR ．TheproteinlevelsofVEGFand survivinweremeasuredbyELISA andWestem blot respectively．TheapoptosisofK562cellswasdetected byflow eytometry．Results ThelevelsofVEGFandsurvivinmRNA expre