高效液相色谱分析08885.pptVIP

第八章 高效液相色谱分析 第一节 特点与分类 一、特点： 高压、高效、高速、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 第二节 高效液相色谱法的主要类型及基本原理 一、液-固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography） 固 定 相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～ 10μm的硅胶吸附剂。 流 动 相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性。 缺 点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。 二、液-液分配色谱（liquid- liquid partition chromatography） 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 三、离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 固 定 相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流 动 相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离 子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换 剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。 亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+ 阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH- 应 用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 四、离子色谱（ion chromatography） 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术， 其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换 容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和 电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。 有关内容将在第十章第六节中讲授。 五、离子对色谱（ion pair chromatography） 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子 或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水 性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十 六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子 Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离 子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X - 后；在两相间分配。 六、排阻色谱色谱 （size- exclusion chromatography） 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原 理：按分子大小分离。小分子可以扩散 到凝胶空隙，由其中通过，出峰 最慢；中等分子只能通过部分凝 胶空隙，中速通过；而大分子被 排斥在外，出峰最快；溶剂分子 小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰；可对相对分子质 量在100-105范围内的化合物按质量分离。 七