棉花种子的品种鉴定方法探讨.pdfVIP

· 种子科技 · 2·009(12)· ·实验研究 · 文章编号 ：1005～2690(2009)12—0025—03 中图分类号 ：S562．037 文献标志码 ：A 棉花种子的品种鉴定方法探讨 陈志兵 ，梁景阳，张建平 ，晋俊林 (长治县农业局 ，山西 长治 047100) 摘 要 ：对棉花三个新品种潞棉 11号、潞棉 147、潞棉 150脱脂处理后 ，分步提取棉花种子 中的水溶 、盐溶 、醇溶三种主要 贮藏蛋 白，用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 、染色、脱色、拍照．并用德 国GDS一9000凝胶成像系统对电泳图谱扫描 分析。结果显示，同一品种间蛋 白谱带稍有差异，不同品种以不同类型的贮藏蛋 白为特征，潞棉 11号的水溶蛋 白带数多． 与潞棉 147、潞棉 150差异较大；醇溶蛋白在潞棉 147号样 品中电泳带数 多，与潞棉 11号、潞棉 150差异显著 ：潞棉 150盐 溶蛋 白与潞棉 11号 、潞棉 147相 比有 自己的特征 采用这样的方法进行种子鉴定较单一蛋 白更全面、可信 关键词 ：棉花；种子 ；蛋 白；脱脂：提取 ；电泳；谱带 ；鉴定 棉花种子蛋白在植物体 内表达率高，能在种子内 原因，本试验对长治县农业局提供的潞棉 l1号、潞棉 大量积累 。且不易降解 ，其 电泳图谱具有高度的稳定 147、潞棉 150棉花新品种 ，同时采用三种蛋 白的电泳 性、专一性和叠加性。种子蛋白是基 因表达的直接产 数据对种子进行多角度的鉴别，鉴定的结果综合性强 ． 物．同时这种差异不受植物环境生长的影响 ，所 以能真 比较可信。希望这一试验方法为类似棉花的油性种子 实反映个体的遗传差异。棉花种子贮藏蛋白主要有四 品种鉴定提供参考。 种 ，即溶于水 的清蛋 白，溶于盐溶液的球蛋 白，溶于醇 1 材料与方法 溶液的醇溶蛋 白和溶于酸或碱 的谷蛋 白…。前三种蛋 1．1 材料 白是棉花种子的主要贮藏蛋白121。棉花种子除含丰富 实验材料来源于山西省长治县农业局提供的潞棉 的蛋白外 ，还富含脂类 ，对棉花种子蛋白的提取必须脱 ll号、潞棉 147、潞棉 150种子。 脂，方能得到较好的结果 。棉花种子脱脂后蛋白含量为 1．2 方 法 43％～50％_3]。棉花种子的蛋白电泳鉴别法与形态鉴 1．2，1 脱脂处理：每个品种随机选择种子数粒 ．分别用 定法 、幼苗鉴定法 、田间小区鉴定法相 比，具有速度快 、 钳子夹碎 (垫上清洁纸片以防止样品之问的污染)，称 实用性强、准确性高等优点。农作物种子蛋白的电泳鉴 重 ，记录，置 1．5mL离心管中，按 10mLg／加入 乙醚 ，振 别已经在玉米[41、小麦I51、水稻[61、山扁豆l等多种植物中 荡摇匀 ．在 5clC条件下脱脂 1h，再以 1万 rm／in离心 进行了研究 ．而棉花种子的蛋白电泳鉴别 国内外也有 3min，弃上清。如此重复2次，置于通风橱中风于，待用。 较少报道 ．84】，它们为这一领域 的研究提供了很好 1．2．2 分步提取蛋 白：每个 品种 同时取 1O个脱脂样 的经验参考。但是笔者认为 ，所述方法还有一定的局 品 ，按 8mL／g加水 ，振荡摇 匀 ，以 1万 r／min离 心 限性 ，如某些方法的实验条件要求苛刻 ，否则不能得出 30min左右 ，取上清液 20 L(其余沉淀液待用)加等 正确的结论 。通过实验研究 ，我们发现对种子进行脱脂 体积的样品缓冲液 (10mL配方 ：pH8．0的 1mol／L的 处理是关键环节 ，而且三种蛋白在不 同品种中可能出 三 羟 氨 基 甲烷 盐 酸 1．6mL，SDS0．2g，溴 酚 蓝 现特有带型，也可能出现相同带型，若 以某种蛋白作为 0．002g，蔗糖 4g，dH2