蚕豆根尖微核技术研究水体中铊与遗传毒性[J].docVIP

蚕豆根尖微核技术研究水体中铊的遗传毒性 张平1，汪珍春2，姚焱2，袁惜如2，吴燕珍2，陈永亨1 1. 广州大学环境科学与工程学院，广州 510006；2. 广州大学生命科学学院，广州 510006 铊（Tl）是剧毒的重金属元素。含铊矿产资源在开发利用过程中会释放铊，对生态环境和人体健康造成威胁。目前我国尚缺乏水环境中铊的安全标准。文利用蚕豆根尖微核技术(Vicia faba-root tip cells micronucleus test)研究水体中铊的遗传毒性，为生态安全评价提供理论依据。结果表明：水体中铊含量在0～3 μg·L-1范围内，随铊含量的增加，蚕豆根尖微核率和污染指数逐渐加大。当铊含量为2.0、3.0 μg·L-1时，微核率分别为22.69‰和51.51‰，与空白对照差异极显著（P0.01），而且污染指数分别为3.80和8.63；铊对蚕豆根尖细胞分裂的作用规律不明显，在铊含量为0.3 μg·L-1时，蚕豆根尖细胞分裂受到显著抑制（P0.05），但随铊含量的增加，根尖细胞分裂并无显著影响。根据统计结果及污染指数，初步确定水体中铊含量1.0 μg·L-1为安全含量，铊含量在2.0 μg·L-1以上时为重度污染。 铊，蚕豆根尖细胞微核技术，微核率，污染指数，细胞分裂指数中图分类号：X826 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（200）0-0047-03铊（Tl）是剧毒的重金属元素[1]。我国拥有丰富的含铊矿产资源，在开发利用过程中，铊被释放入大气、水体和土壤中，每年仅我国进入环境中的铊就达15～20 T[2]，对生态环境和人体健康造成潜在威胁[3]。我国黔西南地区金汞矿及云南南华砷铊矿床开发过程中，曾发生重金属铊污染水源及农作物而导致居民中毒和死亡的事件[4-6]。鉴于铊对人体健康的威胁，美国、俄罗斯等国制定了水环境中铊的安全标准[7-8]，但目前我国尚缺乏水中铊的环境安全标准[9]。张忠通过对铊矿区居民饮用水情况调查，建议我国饮用水中铊安全无毒害含量为1 μg·L-1 [4]，但缺乏相应的理论评价依据。 蚕豆根尖细胞微核技术(Vicia faba - root tip cells micronucleus test) 在环境污染监测和致突变剂检测研究中得到广泛应用。由于蚕豆根尖微核率和染色体畸变率与重金属、农药、抗菌素、生物碱、辐射等的毒性具有较好的相关性，因此能敏感地指示出环境中多种污染物的生态风险[10-14]。1986年，中国环保局确定并规范了其作为水环境生物监测的标准方法之一。因此，本文利用蚕豆根尖微核技术检测水体中铊的遗传毒性，为制定我国饮用水中铊的安全标准提供理论依据。 青皮蚕豆(Vicia faba, 2n=12)，购自湖南丰源种苗有限公司。采用分析纯TlNO3试剂，配制Tl+ 水溶液质量浓度分别为0.3 μg·L-1、0.5 μg·L-1、0.7 μg·L-1、1.0 μg·L-1、2.0 μg·L-1和3.0 μg·L-1，以蒸馏水做空白对照。 蚕豆25 ℃恒温箱中浸种30 h后催芽，初生根长至2～3 cm，选取发育良好，根尖长短粗细一致的种子放于铊处理溶液中浸泡根尖，染毒6 h；将染毒种子洗净后置培养箱中恢复培养24 h；卡诺固定液固定蚕豆根24 h；蒸馏水浸洗两次，5 mol·L-1的盐酸在28 ℃水解25 min左右，直至根尖软化；蒸馏水浸洗两次，Schiff试剂中染色、制片。在Olympus 数码显微镜下镜检观察并拍照。 每处理选择67个根尖，每个根尖随机3个视野, 每根尖观察1000个左右细胞，统计微核细胞数和分裂细胞数，并计算： 微核率MCN(‰）= (带有微核的细胞数/观察细胞总数)×1000；细胞分裂指数CDI (Cell Division Index, %) = (分裂相细胞数/观察细胞总数) ×100；污染指数PI (Pollution index) = 样品微核率均值/对照微核率均值。 所得数据经方差分析，经t检验，进行各浓度处理与空白对照间的差异显著性比较。 铊胁迫对蚕豆根尖微核率有影响，基本表现为随铊质量浓度的升高微核率增大：铊含量1.0 μg·L-1以下时，各处理微核率与空白对照间无显著差异；铊含量1.0～3.0 μg·L-1质量浓度范围，微核率随铊含量增加而升高（见图1），当铊的质量浓度为2.0、3.0 μg·L-1时，微核率分别为22.69‰和51.51‰，与空白对照具有极显著差异（P0.01） (见表1)。 图1 铊对蚕豆根尖细胞微核的诱导 Fig. 1 The inducement of thallium on micronucleus in Vicia faba root tip cells 1. 正常根尖细胞2.