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菲、芘对端足类河蜾赢蜚DNA损伤作用研究 林志浩1王睿睿2闫启仑2 (1．大连海洋大学，辽宁大连116023；2．国家海洋环境监测中心，辽宁大连116023) 摘要：在实验室加标条件下，采用碱解旋法检测菲、芘2种多环芳烃对河蜾赢蜚DNA造成的单链断裂损伤影响。实验结果 显示，河蜾赢蜚DNA的损伤程度随着菲、芘的浓度增加而增大，剂量一效应关系显著。菲对河蜾赢蜚的EC。和NOEC为49p．，g／L 和30 txg／L，芘对河蜾赢蜚的EC50，NOEC和LOEC分别为10．3#,g／L，2．5¨g／L和5．0Ixg／L。 关键词：多环芳烃；碱解旋法；DNA损伤 1 引言 DNA损伤是应用较广泛的一项指标。陈奕欣、李钦 等用碱解旋法分别检测了苯并(a)芘、芘对梭鱼肝脏 多环芳烃(PAHs)是海洋环境中多见的一类重 和鳃的DNA损伤；Bihari等测定了蟹(Majacrispata) 要有毒有机污染物，具有慢性毒性和致畸、致癌、致 和贻贝(Mytilus 突变的“三致”作用，由于其大多数在水中的溶解度 小，亲脂性强，易通过径流、大气沉降、污水排放和海 (Asterias 水养殖进入海洋环境。多环芳烃在体内代谢过程中 这一指标可用于自然海域污染状况的监测。但有关 转化为多种中间代谢产物，这些中间产物多为活性 端足类DNA损伤的研究在国内外尚未见报道。 极高的亲电化合物，可与DNA大分子相互作用，导 端足类是海洋底栖生物的重要组成部分。端足 致多种DNA损伤，如加合物形成、链断裂、碱基的非 类河蜾赢蜚(Corophium 正常化学修饰或缺失等。DNA单链断裂是一种重要 性敏感性，是对重金属、石油烃、农药、多环芳烃等各 类型的DNA损伤。单链断裂还可在许多过程中被诱 种污染物检测的良好的受试生物。因此，本文选用河 导产生，如切割修复、与DNA嵌合试剂相互作用、细 蜾赢蜚作为受试生物，探讨菲、芘等2种多环芳烃对 胞由于自溶或崩裂而降解、形成碱易变位点、链内交 其DNA的损伤，为揭示多环芳烃对端足类生物的致 联、DNA一蛋白质交联等。有机化合物诱导的DNA单 毒机理，丰富端足类受试生物检测海洋有机污染物 链断裂主要是由于有机化合物经细胞代谢产生的中 的检测指标提供依据。 间代谢物与DNA结合形成的加合物转化而来。这些 2材料和方法 加合物可包括3种类型；(1)稳定加合物；(2)可进一 步导致形成碱不稳定的无嘌呤位点的加合物；(3)不 2．1仪器和试剂 稳定加合物。DNA单链断裂主要是由后2种加合物 SIGMA 转化而来。 荧光分光光度计(Cary 碱解旋法是检测DNA单链断裂的敏感方法。在 Aldrich，Hoechst 碱性条件(pH11．5)下，DNA在分子内单股断裂处为国产分析纯。 发生链分离。碱解旋法正是利用了DNA分子的这一 2．2实验动物和加标实验 特性，经一定时间的碱解旋，残余的双链DNA量与 在大连市郊龙王塘潮问带采集野生待产雌性河 断裂点的数目成反比，或转化为单链DNA的双链 蜾赢蜚亲体，迅速带回实验室，恒温培养。培养条件： DNA的数量正比于断裂点的数目。这种方法通过检 温度20℃，盐度25，自然光照，连续充气，投喂新月 测DNA分子的完整性来证明有机化合物对DNA的菱形藻和青岛大扁藻组成的1：17昆合饵料，辅以人 作用。为了对环境污染进行早期报警，20世纪70年工复合饲料。实验采用同步化处理后2