体外磁标记骨髓基质细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的在体磁敏感加权成像研究.pdfVIP

巾同医学影像技术研究会第七次伞国会员代表大会髓第一十五次学术人会 体外磁标记骨髓基质细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的 在体磁敏感加权成像研究 李华丽程敬亮张勇王娟 郑州大学第一附属医院放射科磁共振室450052 iron 目的：采用超顺磁性氧化铁颗粒(superparamagneticoxide，SPIO)体外标记大鼠骨髓基质细 malTOWstromal 胞(bone 模型大鼠脑内的分布及移行。 方法：采用Feeney[4]／洲作创伤性脑损伤(TBI)模型。体重200--250g雄性SD大鼠共24只， 周龄体重约1209的SD大鼠，颈椎脱臼处死，酒精浸泡后无菌条件下取出双侧胫骨及股骨，用不含 血清的DMEM培养基反复冲洗骨髓腔，将冲洗获得的细胞悬液离心，细胞沉淀中加入适量含lO％ 件下共同孵育。细胞普鲁士蓝染色：贴壁干细胞去除培养液后以磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，蒸馏 4％戊 二醛固定，PBS液充分清洗后放入1％锇酸中固定，再用PBS充分清洗，酒精梯度脱水，再行100％ 丙酮脱水两次，环氧树脂混合物包埋，Leica超薄切片机切片，醋酸铀及柠檬酸铅双重电子染色，日 氯醛O．3ml／100 g体重腹腔注射再次麻醉后，俯卧固定于立体定向架上，损伤顶叶皮层接受细胞移植。 移植位点：左顶叶脑损伤周围皮质(前囟后3ml-fl，旁开2rain，深3nun)，垂直距离以硬脑膜为标准。 记BMSCs：D组仅移植等量的培养液。取3“l细胞(约O．5×105)悬液或对照液5rain内注射，留针5min， 000 然后缓慢拨出注射针头。移植完毕缝合头皮，腹腔注射庆大霉素2 U抗菌治疗，回笼饲养。MRI 3．0TrioTimI-class 采用SIEMEMS MR扫描仪和LOOP4线圈，行横断面SWI序列扫描，扫描参 ml／100 平行。组织普鲁士蓝染色分析MRI扫描后，lO％水合氯醛0．3g腹腔注射，左心室灌注4％ 多聚甲醛，断头取脑后石蜡切片进行普鲁士蓝染色。 结果：原代培养第2天即有单核细胞贴壁生长，但混杂有大量红细胞。34d换液后可去除部分 红细胞，贴壁细胞于5-l后进入对数增长期，6-7d时细胞可生长达瓶底70／．左右相互融合，出现漩 涡状、菊花状密集生长(图IA)。胰酶消化后传代，传代后细胞生长迅速，约2．3d即可长满培养瓶 底，达融合状态。经传代培养后，细胞形态逐渐均一化，传至第3代后，多数细胞为成纤维样细胞。 ．．．—．222．．．—— 中同医学影像技术研究会第七次令l司会员代表大会髓第■十五次学术大会 可见细胞质有黄色铁颗粒。行普鲁士蓝染色后，标记骨髓基质细胞胞质内可见阳性蓝色颗粒(图2A)。 透射电镜下胞浆内可见许多囊泡样包涵体，囊泡内有浓聚细小的铁颗粒。(图2B)各组试验动物均 于移植后1天、1周及3周行Mlu扫描，A组6只试验动物在各个时间点均可见位于左侧半球的移植 上显示为左侧顶叶皮层半圆形低信号。B组仅在1天行M刚检查可见低信号，l周及以后行MIu检 查低信号消失。C、D两组在各个时间点均未见显示。A组动物左侧顶叶皮质的类圆形低信号在l 周及3周时均能清楚显示其形态分布及走形情况，在SWl序列的SWI图上显示清晰(图3D和E)。 分布。 超顺磁性纳米铁颗粒标记许旺细胞及体外磁共振示踪的实验研究 李康安l秦金保2张贵祥l沈尊理2 上海交通大学附属第一人民医院放射科 200080 上海交通大学附属第一人民医院整形外科 200080 目的s研究超顺磁性纳米铁颗粒(SPIO)体外标记小鼠许旺细胞(SCs)及MRI成像示踪的可行性。 方法：分离、纯化新生C57B