铁载体合成细菌动态变化与初步鉴定研究.pdfVIP

768 2009中国草原发展论坛论文集 铁载体合成细菌动态变化与初步鉴定研究一 席琳乔，周 斌，刘 婷 (塔里木大学动物科学学院新疆843300) 引 言 南疆是新疆棉花的主产区，其棉花产量约占新疆棉区总产量的80％，大部分土壤属于盐碱土，缺 氮少磷钾一直存在，而且一些微量元素以无效态存在，特别在高产的地区，铁限制了棉花的生长，解 决铁的不足，可以通过施铁肥(利用效率低)、挖掘植物本身的潜力、另外就是发挥根际微生物的作 用，提高铁的利用效率，微生物铁载体就是生长在低铁环境中的细菌和真菌合成的一种具有很强的特 异螯合Fe3+的小分子化合物，是一种低分子量、高铁螯合力的化合物。植物根际铁载体合成细菌通过 分泌铁载体竞争铁营养，不仅能够改善自身的营养状况，还能够供给植物铁营养或通过与植物病原竞 争铁营养达到生物防治的作用。不同的微生物产生的铁载体结构和性质有很大的差异，检测方法有 CAS检测方法，Arnow和Casky法，免疫学方法，纸电泳法等。 通过研究根际铁载体细菌的动态变化和数量特征，采用CAS平板分离分泌铁载体的细菌，筛选高 产铁载体的菌株、测定铁载体的分泌能力、检测铁载体的类型，初步鉴定分泌铁载体的细菌，为提高 盐碱地棉花根际铁利用效率提供依据。 一、材料与方法 (一)试验地概况 40。20--41。47 718”，该区属暖温带荒漠干旱气候，降水稀少，年平均降水量仅为42一．,76mm，而年平均 蒸发量(潜势)却达1900～2800mm。全年日照时数2556．3～2991．8h，年平均气温8．9～11．4℃， 无霜期183～221d。作物主要有棉花、水稻等。 (二)材料 1．土样采集及保存 在南疆阿克苏地区的棉花地中，于7月、8月、9月用土钻分别采取棉花长势整齐的，连续性的， 具有代表性的植株根系土层，选取5个点，分别在O～20cm，20～40cm根系周围收集一定量的土壤样 品，并且编号记录，置于保鲜袋中放入冰箱保存。 2．培养基 -···作者简介：席琳乔(1978．2一)，男．汉，甘肃镇原人，硕士，讲师，主要从事草地生态教学与科研。email： 63．com gsxlq666@1 试验研究 769 mol／L磷酸盐缓冲液pH6．8，其磷酸缓冲 十六烷基三甲基溴化铵(HDTMA)0．14569／100ml和0．1 2．2427 0．5905 H20 g，NH4Cl 液每100mL含Na2HP04·2HzOg，Nail2PO,·2 g，KH2P040．075 0．250 0．125 mL，10％水解酪蛋白氨基酸3 g，NaCl g，使用稀释10倍。每100mL含20％蔗糖溶液1 mL，1 2 mmol／LCaCl2 mmol／LMgS04mL，琼脂1．8g在约60C时缓慢加入盐溶液和CAS 100肛L，1 染液各5mL，即得蓝色检测培养基。 LB培养基组成：10 NaCI，20 7．0，1L。 g葡萄糖，5g酵母膏，59一--lOg g琼脂，pH SA培养基组成：蔗糖20．og、L一天门冬酰氨2．0g、K2HP040．5g、MgSOt·7H200．59；8一 羟基喹啉除铁后，无外加铁离子，其本底铁离子浓度约为：0．16／Jmol／L，pH=7，1L。 (三)方法 1．根系微生物的分离与纯化 145 称取鲜土样109溶于100mL已经灭菌的去离子水中，并置于摇床上在28C