应用COI基因进行实验动物大小鼠遗传监测的研究.pdfVIP

第九届中国北方实验动物科技年会会议论文 产生相应的表型，因此被认为是一个在内源性基 因功能研究领域的有效工具剐。RNAi技术因其采用的外源DNA转移方法为传统的原核显微注 操作简单、特异性高、能迅速而方便地使某个基 射方法，将表达shRNA的载体注射到受精卵原核 因失去功能，故应用广泛。本研究中，我们应用 内f8】，该方法具有外源基因转移率高，长度不受 RNAi与转基因技术相结合的方法制备ApoE基因限制，实验周期相对较短等优点。除此方法外， 敲减大鼠，转入的shRNA片段可随机整合于基因还可以通过电穿孔技术将shRNA表达载体导入胚 胎干细胞，通过囊胚注射制备转基因动物【91，或 组，其转录后形成的siRNA能特异抑制ApoE基 因表达，达到基因敲减目的。不同的siRNA序列者用带有shRNA编码序列的重组慢病毒感染胚胎 沉默基因的效率存在很大的差别，因此设计有效 干细胞或早期胚胎来获得转基因动物[10】。 的siRNA是实验成功的一个关键因素。我们选择 综上，我们应用RNAi与转基因技术相结合 Dharmacon公司的siRNA设计软件进行设计，因 的方法制备ApoE基因敲减大鼠模型，为进一步 为该设计软件在严格遵循TusculsiRNA设计原则 更好地研究ApoE基因功能及深入了解AS致病机 的基础上将设计出的siRNA序列自动进行BLAST制奠定基础。 同源分析，并且该软件还提供了一个辅助设计避 免脱靶的策略，可以在一定程度避免脱靶的发 参考文献(略) 生。根据软件分析结果，选择分值比较高的针对 应用COl基因进行实验动物大小鼠遗传监测的研究 郭晓冲，张梅英，汪 瑛，姜蒙蒙，杜 冰，郑志红 (中国医科大学实验动物部沈阳 110001) 摘要：目的应用细胞色素C氧化酶基因(coi)建立一种新的实验动物遗传监测的方法。方法根据小鼠、 大鼠基因组数据库序列，设计引物扩增不同品系小鼠和大鼠的细胞色素c氧化酶基因，测序后比较不同品系小 鼠、大鼠的细胞色素C氧化酶的基因序列是否存在差异。结果：同一品系不同个体实验动物间COI序列完全一 致，同一物种不同品系动物的COI序列无差异，大鼠小鼠COI基因序列差异稳定。结论细胞色素c氧化酶基因 序列分析可以区分不同物种的实验动物，不能用于不同品系实验动物的遗传监测。 关键词：细胞色素c氧化酶实验动物遗传监测 1 前 言 (COI)在不同物种间存在序列差异，法医学研究把 COI基因作为物种鉴定的一种分子标记11，21。本实验 科学研究需要标准化的实验动物，除了需要对 利于DNA测序技术探索不同品系(种)实验动物 实验动物的饲养环境进行严格控制外，还需要对实 之间COI基因的序列差异，以期建立一种更准确的 验动物的遗传背景进行监测，以保证实验动物的均 实验动物遗传监测方法。 一性和实验结果的可靠性。细胞色素c氧化酶基因 author *Corresponding 基金项目：辽宁省科技厅攻关项目2010232006；辽宁省高校科研项目计划2009s109 —136- 第九届-}|国北方实验动物科技年会会议论文 2材料与方法 3结果 2实验动物所有实验动物均由中国医科大学实 31 PCR结果使用3对引物均能有效扩增不同品 验动物部提供(许可证号：SCXK(辽)2003-0009)，小系的大小鼠COl基因，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳 鼠品系包括：C57BLl6，DBA／2，BALB／c，129， FVB．ICR，KM，BDFI及SCID．大鼠品系包括鼠基因组作为刚性对照，水作为空白对照，果蝇基 sD和Wistar。不同品系实验动物各取3只。 因组作为阴性对照。第对引物的PCR产物琼脂糖 2．2 凝