应用结核分枝杆菌DNA疫苗治疗耐多药结核病的研究.pdfVIP

为阳性，而无临床结核病证据者判断为潜伏感染。在2000年全国结核病流行病学调查结果显示 PPD皮试的结果在不同地区和人群中有所差别，可见仅依靠PPD皮试结果判定结核菌感染与否是 不可靠的，很多结核菌感染者，甚至是活动性结核病人PPD皮试也可阴性或一般阳性。 感染M．tb后机体主要以细胞免疫为主，而特异性的细胞免疫主要是由T细胞所主导。IFN．Y 是Thl细胞分泌的一种细胞因子，当人或动物感染了M．tb后，具有免疫活性的T淋巴细胞识别M．tb特 异性抗原并产生高水平的IFN．Y。因此理论上只要检测出IFN．Y释放水平就能反映Thl细胞的免疫 状态，从另一个侧面反映M．tb的感染情况。事实上国外已经有相应的试剂用于M．tb潜伏感染的诊 断。我们在早期建立了外周血单个核细胞释放IFN．y的Eilsopt检测方法，对结核病人检测显示了 较好的敏感性和特异性。 疫苗接种和其他非结核分枝杆菌的感染所影响。特别是在中国儿童普遍都接种BCG疫苗，而接种 我们还发现，与结核患者接触的次数与特异性结核菌抗原IFN．Y水平呈显著正相关，但与PPD皮试 初步的观察，但本实验所建立的体外IFN．Y Elispot检测对M．tb潜伏感染早期诊断显示了较好的前 景。 应用结核分枝杆菌DNA疫苗治疗耐多药结核病的研究 吴雪琼1，梁艳1，张俊仙1，李宁1，余琦1，阳幼荣1，宋晶滢1，白雪娟1， 刘成龙1，王兰1，刘庆良2，张平京2，史迎昌1，李忠明2 1．中国人民解放军总医院第二附属医院结核病研究所100091 2．上海海规生物科技有限公司疫苗实验室 结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性呼吸道传染病，也是单一致病菌感染导致病死率最 高的感染性疾病。近年来，由于人口流动增加、耐多药结核分枝杆菌菌株出现、结核病与艾滋病 伴发感染以及对结核病不规则化疗等原因，使发展中国家结核病疫情居高不降。我国的结核病疫 情也相当严重，在全球27个结核高负担国家中位居第二，仅次于印度。根据2000年第四次全国结 核病流行病学抽样调查结果显示，我国现有肺结核病人45l万，每年死于结核病的人数达13万， 为各类其他传染病和寄生虫病死亡人数总和的2倍。我国结核病的流行具有患病率高、耐药率高 等特点，根据2009年国家卫生部陈竺部长在耐多药／广泛耐药结核高负担国家部长级会议上报告， 8．32％，广泛耐药率为0．68％。耐多药结核病已经成为世界结核病控制的一大难题，由于目前治 疗耐多药结核病的二线药物副作用较大、价格较昂贵：研制新的抗结核药物，不仅投入大，周期 154 长，至今已40多年无有效的抗结核药物问世，而且新药也可能很快产生耐药性。耐多药结核病的 治疗面临巨大的挑战。 抗结核免疫主要是细胞介导的免疫反应，疫苗治疗可以通过调节或选择性地诱导结核病患者 免疫系统蕴藏的潜力，来达到治疗疾病的目的。而且疫苗治疗在几个月中只注射几针，远比每天 服药方便，副作用较少，费用低。因此，通过免疫调节治疗结核病成为研究的热点之一，治疗性 疫苗的研究与开发成为一个十分重要的研究方向。目前国内外的研究已表明，应用DNA疫苗进行 免疫治疗不仅可以诱导细胞免疫反应，提高机体抗结核免疫力，还可提高化疗效果，缩短疗程。 因此，DNA疫苗可能成为一种新的、具有潜力的预防和治疗疾病的制剂。本文研究应用DNA疫苗 治疗小鼠耐多药结核病的免疫治疗效果，以期获得治疗耐多药结核病的新的免疫制剂，开辟耐多 药结核病治疗新途径。 材料与方法 只，同批试验体重差异不超过2克。 2．耐多药结核分枝杆菌菌株的选择、鉴定：耐多药结核分枝杆菌菌株HB361从结核病患者痰 标本中分离后，按“结核病诊断细菌学检验规程”进行传统的分枝杆菌菌种鉴定和药敏试验。耐 rpoB、rpsL、ITS、embB基因序列，通过BLAST分析基因突变情况。 3．制备耐多药结核病模型：用2．2×105CFU的结核分枝杆菌高耐利福平(RFP)、低耐异烟肼 4．小鼠感染情况：感染后8周，随机取5只小鼠进行解剖，解剖后肉眼观察小鼠肺和脾大体病 理改变；并进行肺和脾的活茵计数。 5．免疫治疗：于感染后第2天开始治疗： (2)RFP治疗对照 (