原花青素交联猪主动脉心脏瓣膜研究.pdfVIP

原花青素交联猪主动脉心脏瓣膜研究 翟万银常江’ 中国科学院上海硅酸盐研究所生物材料与组织工程研究中心，上海，200050 关键词 生物嚣学工翟·o脏瓣腱原花素素 竞联 心脏瓣膜瘸是危及人类健康的一种严重疾病．目前临床上为这类瘸人晨换的生物瓣主要是由戊二 醛交联处理牛心包或猪主动脉瓣簇备衙成[1]．虽然艉物瓣相对于机城瓣来说，不易造成血栓，但戊二装 交联制备的生物瓣不够柔软，容易在体内工作时形成应力集中，最后导致瓣膜撕裂或钙化衰败，造成生 物瓣工作寿命不长[|]．另外t由于交联剂本身的毒性、不能完全消除异种瓣膜原有的免疫膘性等。使被 移植的病人也常面临这种免疫爱应带来的损伤【1]．因此有岿要寻控一种新的生物瓣材料的处理方法， 寻找适合的交联烈，以提高交联材辩的机械性能，同时交联荆本身不能有毒愫或只能有极低的毒性。能 够利于瓣膜组成细胞长人“】．为寻找这样理想的交联剂．人们对此作￥裰多探索，如采用多聚环氧化物 a戚nopropyl)∞rbodi．mide di— hydrochloride。EDc)、a卣pyl isoc”舶te，HMDc)、藻酸藤氮化物(algi触te西de)和藻敌钠(∞dium 理动物脱细胞瓣膜，但是交联效果和交联剂奉身的毒性等方面仍不够理想，与戊二醛相比改进不大． 娘花膏索是一类广泛存在予水果、蔬菜、花瓣、种予以及树皮中的植物次生代谢产物，也是红简萄涵豹重 要成分·被广泛尚作天然抗氧化剂、彦由蒸清除剂、心脑血管保护荆，具有抗菌、抗病毒．抗炎、抗癌等活 性·其体内代谢途径清楚．磋且没有毒饿【s】．本研究采用原花青素作为交联荆交联猪主动脉心脏瓣膜。 通过检测交联后的力学特性t研究艨花霄索对猪主动脉心脏瓣膜的交联功艘，探索琢花青素作为生街 瓣交联剂的可能性。 一、材料与方法 (一)试剂 版花青素由天津尖峰天然产物公司赠送，其他化学试剂均为国声分析纯． (二)仪器 光光度计为天美公司产品，酶栎仪为BioTech公司产品． (三)交联方法 2．5％胰酶37。C下消化30m．n。再以脱细胞处理液(含O．25％的Triton ·16· 0．02％的EDTA)及脱细胞棱处理液(舍RNa陡I200mg／L和DNa∽I 脱细胞瓣膜，充分穗洗备用．选择大小一致的脱细胞瓣膜分组．分别以2．5，5，10，20mg／mL的原诧 青素或6．25mg／mL的疲二醛溶液，37。C下摇动交联48小时． (四)瓣膜力学性能测试 2mm的速度傲拉仲测试．每片瓣膜拉断时，单个样品测试结束，仪器自动给出拉伸率、拉伸强度和最大 拉伸力，按仪器操作手耱操作获得材料最大弹性模童． (五)交联后瓣膜的稳定性检测 1．交联后瓣膜的储存 采甩lO mL 释蟹，同时测定所储存瓣膜约力学性能。 2。原花青素含量豹溺定 心整瓣膜交联看，分稍取其交联残余溶液、潦洗液及储莓不同时间后的储存液，分别作服花鬻索食 M 鬣测定．将样品稀释．加入12％卺兰索和1．2 参照栝堆曲线计算出愿花青索浓度．推算出交联后心脏瓣膜及其储存后原花青紊含羞． (六)变联瓣膜的细胞相容性 1．交联剂对血管平滑肌细胞的作用 同浓度的原花青素和6．25mg／m己戊二醛溶液。培养6天后MTT检测细胞增殖活力． ： 2．瓣膜问质细胞在脱细胞瓣膜上的种植 养6夭，扫描电镜观察． (七)数据统计 按每维6个样本求平均值和标准差，以smdentst～test软件梭测组问差异照著性． 二、结果 (一)交联后力学特性 mg／mL)交联豹脱 原花膏索所交联的脱细胞瓣膜(浓度为2．5、5、lO纛20mg／mL)与戊二醛(6．25 细胞瓣簇、不交联的脱细胞瓣膜(O 的脱细胞瓣膜最大抗拉强度优于戊二醛交联的脱细胞瓣膜，也优予不交联的脱细胞瓣貘．其拉