中药提取制剂对乳酸菌体外培养增殖的影响.docVIP

中药提取制剂对乳酸菌体外培养增殖的影响 曹国文 周淑兰 姜永康 曾代勤 戴荣国 徐登峰 陈春林 翟少钦 （重庆市畜牧科学研究院 402460 荣昌） 摘要：本试验选用党参、黄芪、枸杞、山楂、女贞子和杜仲叶以煎煮法制备提取液，对乳酸杆菌进行体外增殖试验。试验结果，除枸杞外，其余5味中药均对乳酸杆菌有增殖作用，但以女贞子20~40mg/ml、黄芪20mg/ml、杜仲叶80mg/ml和党参80~100mg/ml的增殖效果显著（P＜0.05）。试验表明，添加量对其增殖作用有较大影响。本试验为益生素协同剂与合生元的研究和应用提供了依据。 关键词：中药提取液 乳酸菌 增殖 影响 中草药和益生素作为“绿色”饲料添加剂已在畜禽养殖业中推广应用，对生产无公害畜禽产品，促进“绿色”养殖业的发展起到了积极的作用。乳酸菌是大多动物肠道中的优势菌群，被世界各国列为允许在畜禽体内使用的益生素生产菌种[1]。乳酸菌的增殖，不但能提高机体的消化机能，促进营养物质的吸收，并竞争性地抑制某些入侵的病原菌或抑制肠道内有害菌的增殖。所以增加乳酸菌、双歧杆菌等益生菌在肠道内的数量，这无疑对畜禽的健康有益。益生菌在胃肠道增殖后，还能合成维生素，增加营养，辅助食物消化，促进宿主代谢，抑制蛋白质腐败、有助于恢复和保持正常胃肠道功能，增加胃肠蠕动，促进消化和吸收，提高增重和降低料耗，增加经济效益。为了更好地发挥乳酸菌的有益作用，人们不断地寻找和研究协同剂，以求能提高乳酸菌在产品中的数量和生存率，延长其作用时间，使乳酸菌能以更多的数量到达畜禽体内，刺激肠道内源性及外源性乳酸菌的定植和生长，增强乳酸菌的代谢活性等。研究表明，中草药作为畜禽饲料添加剂，不仅可以提高动物的生产性能，还能促进乳酸杆菌和双岐杆菌增殖，而且毒、副作用极小[2]。本文主要就六种中药提取液对乳酸菌在体外培养的协同增殖作用进行了研究，为筛选益生菌协同剂提供依据。 ※重庆市科委攻关项目2002-20-4“畜禽微生物饲料添加剂的研究”资金资助。 作者简介：曹国文（1956-），男，汉族，四川省营山县人，大专，高级兽医师。 1、材料与方法 1.1试验材料 1.1.1中药：党参、黄芪、枸杞、山楂、女贞子购自荣昌县长寿中药行，经鉴定均为地道中药材。杜仲叶收购于荣昌县农村。 1.1.2乳酸菌：乳酸杆菌，本院兽医兽药研究中心从猪肠道分离鉴定冻干保存。 1.1.3培养基与试剂：改良MRS培养基，自制；试剂购自重庆市医药公司化学试剂部。 1.2试验方法 1.2.1中药提取液的制备：称取中药，分别加6~8倍水按常规煎煮3次，每次1小时，合并煎煮液，减压浓缩至1：1，沉淀，离心，制成每ml含原药1g的中药提取液，高压灭菌后冷藏备用。 1.2.2含药培养基的制备：以改良MRS液体培养基为基础培养基，加入不同比例的中药液，制成含不同中药（原药）浓度即每ml含20mg、40mg、60mg、80mg、100mg的含药培养基，每个浓度分装4支试管，每管10ml，115℃灭菌15分钟后作为试验用培养基。对照用培养基为改良MRS液体培养基。 1.2.3种子菌液的制备：取冻干乳酸菌菌种，以MRS液体培养基复壮1代，然后接种改良MRS液体培养基，在37℃培养16小时后作为试验用菌液（每ml含菌约2.6×109）。 1.2.4增殖试验：不同浓度含药培养基（每个浓度3个重复）与对照MRS培养液，每管均加入0.1ml的16小时乳酸菌培养物，置37℃培养24小时后参照文献[3]介绍的滴种法进行计数，并比较试验结果。 1.2.5数据处理：以SPSS系统进行数据处理与分析。 2、试验结果 将含有不同浓度党参、黄芪、枸杞、山楂、女贞子和杜仲叶提取液的培养基等量接种乳酸菌，培养24小时后进行细菌计数，结果见表。 六种中药提取液对乳酸菌体外培养增殖试验结果统计表 中药名称 含药浓度（mg/ml） 乳酸菌数cfu／ml 山 楂 20 （8.17±1.17）×10 9 40 （4.17±0.33）×109 60 （2.50±1.50）×109 80 （2.83±1.33）×109 100 （2.