雷公藤内酯醇对人结肠癌SW480的抗肿瘤作用及相关机制的研究论文.pdfVIP

雷公藤内酯醇对人结肠癌SW480的抗肿瘤作用及相关机制的研究 许建华，胡盈莹，陈元仲 福建医科大学药学院(福州交通路88号，350004) 雷公藤内酯醇(triptolide，TPL)又称雷公藤甲素，是从卫矛科雷公藤属中分离到的 主要有效成分，系二萜内酯化合物。前期研究发现TPL对人结肠癌等消化道肿瘤的裸鼠移植 模型具有较强的抗癌作用，强于临床上消化道肿瘤常用的化疗药物。本文探讨雷公藤内酯醇 对人结肠癌SW480的体内外抗癌作用及相关机制。 一、雷公藤内酯醇体外抗结肠癌细胞SW480作用及相关机制的研究 目的：探讨雷公藤内酯醇对结肠癌细胞SW480体外作用及相关机制。方法：(1)用册T 法观察雷公藤内酯醇对细胞增殖的影响；(2)用集落形成法观察TPL对细胞集落形成的影响； I、TOPO (3)用AO／EB荧光染色法检测细胞凋亡率；(4)从SW480细胞中提取含有的TOPO I、TOPO II粗酶溶液用于实验，通过TOPO II介导的负超螺旋pBR322解旋反应检测TPL对 TOPOI、TOPO II酶活性的影响：(5)用浊度法检测，TPL对提取的猪脑微管蛋白体外聚合 mRNA的影响；(8)用Westernblot 响；(7)用RT-PCR半定量法检测TPL对SW480细胞HSP70 方法观察TPL对热休克蛋白70(HSP70)及与细胞增殖和凋亡有关信号分子的影响；(9) lI 度对SW480细胞TOPOI的酶活性无明显影响；当TPL浓度达到400g／ml时，才能够抑制 SW480细胞TOPOII的酶活性：(5)TPL在有效浓度对体外微管蛋白聚合反应无明显影响； 效浓度能下调HSP70mRNA和蛋白表达，且呈量效及时效关系：(8)TPL在有效浓度能下调 破坏；(10)SB203580部分阻断TPL对SW480细胞的增殖抑制和凋亡作用。 二、雷公藤内酯醇与奥沙利铂合用对SW480细胞的抑制作用及相关机制的研究 目的：结肠癌治疗产生耐药的原因之一，是化疗药物诱导细胞大量表达HSP70，TPL在 体外对SW480细胞产生抗癌作用的同时可下调HSP70，这一特点提示，TPL与结肠癌治疗的 联合对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响；观察TPL与OXA合用对HSP70以及与细胞增殖 和凋亡有关的信号分子的影响。方法：(1)用MTT法观察TPL与OXA联合对细胞增殖的影响； 联合对细胞Caspase一3和caspaSe一9活性的影响：(5)用Westernblot方法观 察TPL与OXA联合对热休克蛋白70(HSP70)及与细胞增殖和凋亡有关信号分子的影响； TPL与OXA协同抗SW480细胞增殖，作用48 与OXA联合对P-Erkl／2、Erk 与OXA联合对SW480细胞的增殖抑制和凋亡作用。 三、雷公藤内酯醇与奥沙利铂合用对SW480细胞裸鼠异种移植瘤的作用及相关机制的研究 目的：探讨雷公藤内酯醇与奥沙利铂对SW480细胞裸鼠移植瘤的同抑制作用及其可能的 机制。方法：(1)建立SW480细胞裸鼠异种移植瘤模型；(2)实验设2％丙二醇生理盐水阴 性对照组、雷公藤内酯醇组(0．1mg／kg)、奥沙利铂组(5mg／kg)、雷公藤内酯醇和奥沙利铂 天给药一次，共7次；奥沙利铂采用腹腔给药，每3天给药一次，共5次。末次给药后24 小时，处死裸鼠。称量离体瘤块重量、计算抑瘤率；(3)摘除眼球取血检测血常规及肝肾功 能；(4)瘤组织HE染色光镜下观察TPL和／或OXA对肿瘤组织形态结构的影响；(5)免疫组 0．1mg／kg 或OXA对肿瘤组织中HSP70、p53、Bax的蛋白表达的影响。结果：(1)低剂量TPL 血常规及肝肾功能检测结果与阴性对照组比较无显著性差别；(3)免疫组化显示，阴性对照 达明显减少，且联合组的HSP70表达弱于TPL单药组；(4)免疫印迹结果显示，TPL组和 均有所减少：三个给药组Bax的含量明显高于对照组。