高效液相色谱测定发酵液中1,3-二羟基丙酮(DHA)方法的建立.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2008，28(1)：61～64 高效液相色谱测定发酵液中 1，3-二羟基丙酮 (DHA)方法的建立木 饶志明 徐美娟 沈 微 方慧英 诸葛健 (江南大学工业生物技术教育部重点实验窀江南大学工业微生物研究中心 无锡 214122) 摘要 建立了简单且准确的测定 l，3．二羟基丙酮 (DHA)的高效液相色谱 (HPLC)方法。以 AlhimaC18(5m，250×4．6mm)为分离柱，5％甲醇水溶液 (0．05％HPO 调 pH至3．0)，流速为 lmE／min，用紫外检测器在200nm处检测DHA。结果测得DHA标准样品的保留时间为6、2min， 并测得 DHA的线性范围为0．1～l0．0g／L，用HPLC法测得 以甘油为底物发酵产 DHA发酵液 中 DHA含量为6．2g／L，并证明高效液相色谱法可有效应用于产DHA发酵过程中产物的检测。 关键词 1，3-二羟基丙酮 高效液相色谱 检测 中图分类号 Q819 1，3．二羟 基丙 酮，又称 二羟 丙酮，英 文 名为 显色——二苯胺显色测定法的进行了精确性 比较 。由 dihydroxyacetone，简写为 DHA，是最简单的多羟基酮 于显色法线性范围很窄(0～0，3g／L)，用高效液相色谱 糖，是唯一一个没有手性碳原子的糖，带有甜味的白色 法来分析检测发酵体系中的DHA具有现实意义，为本 或类 白色粉末状结晶，易溶于水及乙醇、丙酮和乙醚等 实验室筛得的以甘油为底物产 DHA菌株的工业化应 有机溶剂。DHA用途广泛，且使用量大，是一种重要的 用打下了良好的基础。 医药中间体、化工原料和食品添加剂、化妆品防晒剂的 1 材料与方法 成分 0。也可作为一种抗病毒试剂，如在鸡蛋胚胎培 养中，能杀死51％～100％的鸡瘟病毒；还可用于果蔬 、 1．1 材 料 水产品、肉制品的防腐保鲜 。；仍有许多其它用途在 1，1．1 仪器与试 剂 高效液相色谱仪：Alhech426 积极的研究和开发之中。 HPLCPump；LINEARUVIS200紫外检测器；微孔滤膜 DHA的分析方法 有化学定性、酶法分析、薄层色 为孑L径0．45i~m，上海亚东核级树脂有限公司；其余试 谱、纸层析、高效液相色谱等方法，其中薄层色谱分析 剂均为国产分析纯。 法所用试剂昂贵且准确定量困难。国内有报道采用了 1．1．2 样 品 1，3．二羟基丙 酮 (dihydroxyacetone． 气相色谱分析法 来定量测定 DHA，由于DHA的挥发 dimer)标样购于Sigma(USA)公司，待测样品为产DHA 性不高 ，需要先将其衍生化为易挥发且稳定性较高的 菌种接种甘油发酵培养基 30℃培养3d后取发酵上 清液。 衍生物才可间接测定 DHA含量，但此方法预处理复 1．2 方 法 杂，且衍生化过程中水分的影响较大，需要加入大量的 1．2．1 DHA显色测定 法 DHA发酵 液离心 衍生化试剂 。本实验建立了高效液相色谱法直接利 (2500r／min，15min)，取 1ml发酵上清液稀释成 lOml， 用 C18柱检测发酵液中DHA的方法，并与传统的化学 取0．5ml十倍稀释液与4．5ml显色液在试管中混匀，置 收稿 日期：2007-09-17 修回日期：2007-12-07 于沸水