农杆菌介导转基因小麦植株的获得和检测.pdfVIP

维普资讯 山东农业大学学报 (自然科学版)，2007，38(4)：493—495 JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScience) 农杆菌介导转基因小麦植株的获得和检测 贾海燕 ，毕瑞明 ，王黎明 ，高居荣 ，王洪刚 2 (1．山东农业大学农学院 泰安 271018；2．国家小麦改 良中心泰安分中心 泰安 271018；3．荷泽学院生命科学系 菏泽 274015) 摘要：利用建立的遗传转化体系，以携带NptII筛选标记基因和胰蛋白酶抑制剂基因的LBA4404／pRok2(农杆菌 ／质粒)对山农995604小麦愈伤组织进行遗传转化 ，获得了三株含有胰蛋 白酶抑制剂基因的转基因小麦。通过 PCR扩增和Southern杂交检测，证明了外源基因已整合到了三株转基因小麦基因组中。 关键词：小麦；农杆菌；转基因植株 中图分类号：0939．1；Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—2324(2007)40 -4093—03 oBTAINM ENTAND IDENTIFICATIoN oF TRANSGENIC WHEAT PLANTSM EDIATED BY AGRoBACTERIUM TUNEFAClENS JIA Hai—yan ，BiRui—ming，WANG Li—ming ，GAOJu—rong ，WANGHong—gang (1．AgronomyCollege，ShandongAgriculturalUniversity，Taian271018，China； 2．TaianSubcentreofNationalWheatImprovementCentre，Taian271018，China；3．LifeScienceDepartmentofHezeCollege，Heze274015，China) Abstract：Usingthesystemoftransformation，shannong995604weretransfomredwithA．tumefaciensLBA4404 containingNptIIandCpTI．Asaresulttransgenicwheatplantswereobtained，andtheywereprovedthatforeign DNA havebeenintergratedintotheirwheatgenomebyusingPCR amplificationandSouthernblottinganalysison thethreetransgenicwheatplants． Keywords：Wheat；A．tumefaciens；Transgenicplants． 1 材料与方法 1．1 外植体及其培养 取开花后 15d左右的山农995604籽粒。在超净工作台上剥取幼胚 ，接种于诱导培养基上，采用的培 养基为改良的MS培养基。以在分化培养基上预培养5d的山农995640幼胚愈伤组织作为遗传转化的受 体材料。 1．2 菌体与质粒 采用的菌株为LBA4404，YEP培养基中进行培养。采用的质粒为pRok2，该质粒中含有NptII筛选标 记基因和胰蛋白酶抑制剂基因，胰蛋 白酶抑制剂基因是从豇豆的基因组 DNA中克隆得到，具有广谱抗虫 性 。质粒结构如： 1．3 转化及愈伤组织的再生 将胚性愈伤组织切成直径约2～3mm的小块，放置到分化培养基上进行预培养 1周左右。取出冻存 的农杆菌液，加入到含有50mg／Lkan的YEP培养液中，振荡过夜，直到有明显的混浊现象，表明农杆菌已 收稿 日期 ：2006—07—27 基金项 目：农业部农业结构调整重大技术专项(20o6—02—40B)和山东省农 良种工程项目资助。 作者简介：贾海燕 (1978一 )，女，博士，主要研究方向为植物分子生物学。 ％通讯作者：Authorforcorrespondence．E—mail：hgwang@sdau．edu．cn 维普资讯 · 494 · 山东农业大学学报 (自然科学版)